全谷豆包植物活性成分及其改善HepG2細胞胰島素抵抗作用與AMPK通路機制探討.pdf

1、目的:(1)提取熟化前后全谷豆包中膳食纖維(DF）、類黃酮(FN)、酚酸(PAD)和植物固醇(PS)，測定其含量和體外抗氧化能力，了解全谷豆包中活性成分提取物產(chǎn)生生物學效應的物質基礎;
　　(2)觀察全谷豆包中活性成分提取物對棕櫚酸(PA）誘導的HepG2細胞胰島素抵抗作用的影響，測定細胞對葡萄糖的消耗量與細胞中甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的含量，闡明不同種類活性

2、成分提取物對HepG2細胞胰島素抵抗作用的干預效果差異;
　　(3)觀察全谷豆包中活性成分提取物對胰島素抵抗HepG2細胞中的腺苷酸活化蛋白激酶α2(AMPKα2)、乙酰輔酶A羥化酶(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)、過氧化物酶體增殖物活化受體γ協(xié)同激活因子-1(PGC-1)在mRNA水平上的影響，探討全谷豆包中活性成分對胰島素抵抗HepG2細胞的作用機制;
　　(4)比較熟化對全谷豆包中活

3、性物質及其改善HepG2細胞胰島素抵抗作用的影響效果。
　　方法:(1)用酶-化學法提取熟化前后全谷豆包中的膳食纖維，按國標法測定其含量;用浸提回流法提取熟化前后全谷豆包中的類黃酮，用超聲波萃取法提取熟化前后全谷豆包中的酚酸和植物固醇，用比色法測定其含量。采用DPPH自由基清除法和T-AOC總抗氧化能力檢測法測定不同活性成分提取物的體外抗氧化能力;
　　(2)用棕櫚酸誘導HepG2細胞建立體外胰島素抵抗模型，通過MTT、油紅

4、O染色、葡萄糖氧化酶法檢測細胞對葡萄糖的消耗量以及細胞中TG的含量，判定胰島素抵抗細胞模型建立成功，確定棕櫚酸最佳濃度;
　　(3)棕櫚酸誘導HepG2細胞胰島素抵抗模型后，加入不同活性成分提取物，測定細胞對葡萄糖的消耗量與細胞中TG的含量和抗氧化指標MDA、SOD、GSH-PX的含量，半定量PCR測定AMPKα2、ACC1、GLUT2、FAS、PGC-1的基因表達。
　　結果:(1)熟化前全谷豆包中膳食纖維的含量為17.5

5、g/100g，類黃酮的含量為2.28g/100g，酚酸的含量為0.62g/100g，植物固醇的含量為4.60g/100g，熟化后全谷豆包中膳食纖維的含量為21.6g/100g，類黃酮的含量為3.51g/100g，酚酸的含量為0.52g/100g，植物固醇的含量為5.88g/100g;熟化前后全谷豆包中不同活性成分均具有很強的清除DPPH自由基能力和總抗氧化能力;
　　(2)0.25mM的棕櫚酸對細胞活性無顯著影響，且細胞對葡萄糖的

6、消耗量顯著降低，細胞內TG顯著升高，細胞內脂滴蓄積明顯，是誘導HepG2細胞形成胰島素抵抗的最佳濃度;
　　(3) MTT實驗中觀察到，適當濃度(200μg/mL)的不同活性成分提取物對PA誘導的胰島素抵抗HepG2細胞有一定的保護作用。與類黃酮組、植物固醇組和膳食纖維組相比，酚酸組的保護作用較弱。油紅O染色結果也顯示，PA可造成細胞內游離脂肪酸升高，而不同活性成分提取物處理后，可減少細胞內游離脂肪酸的形成。200μg/mL熟化前

7、后全谷豆包中活性成分提取物提高了細胞對葡萄糖的攝取能力，與陰性對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05），均明顯低于PA模型組(P＜0.05)。與PA模型組相比，降低了細胞中TG、MDA含量，升高了SOD、GSH-PX含量(P＜0.05），表明熟化前后全谷豆包中活性成分對胰島素抵抗均具有一定的改善作用;
　　(4)與模型組相比，類黃酮組、酚酸組、植物固醇組和膳食纖維組細胞內AMPKα2、GLUT2和PGC-1 mRNA表達顯著增高，且

8、ACC1和FAS mRNA表達顯著降低(P＜0.05)。除酚酸組外，其余組的基因表達改善效果與陰性對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　結論:(1)全谷豆包中富含膳食纖維、類黃酮、酚酸和植物固醇等抗氧化物質。這些活性成分具有很強的體外抗氧化能力;
　　(2)0.25mM的棕櫚酸與HepG2細胞孵育24小時，能使細胞對葡萄糖的消耗量顯著降低，形成胰島素抵抗細胞模型;
　　(3)熟化前后全谷豆包中活性成分可以提高H