魚(yú)鱗ACE抑制肽的研究.pdf

1、高血壓是引發(fā)心血管疾病如心力衰竭、中風(fēng)、冠心病和心肌梗塞等的重要危險(xiǎn)因子。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(Angiotensin I-converting enzyme inhibitors,ACEI)是用于防治高血壓的最重要的藥物之一,但易引起惡心、嘔吐、腹瀉等副作用。因此,高效無(wú)毒的海洋生物源ACE抑制肽的研制具有巨大的市場(chǎng)空間。我國(guó)存在大量魚(yú)類下腳料,這些魚(yú)類下腳料含有豐富的海洋生物源蛋白質(zhì),可為ACE抑制肽的開(kāi)發(fā)提供重要原料來(lái)源。然而,

2、這些魚(yú)類下腳料主要用來(lái)制備低附加值產(chǎn)品,既污染環(huán)境,又造成大量資源浪費(fèi)。
　　 本論文以海洋魚(yú)類下腳料魚(yú)鱗為原料,制備ACE抑制肽,實(shí)現(xiàn)海洋生物資源的高值化和產(chǎn)業(yè)化,在滿足患者需求的同時(shí)避免環(huán)境污染,真正實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)效益。
　　 本文以狗母魚(yú)(Trachinocephalus myops(Forster))魚(yú)鱗為原料,采用響應(yīng)面法優(yōu)化魚(yú)鱗蛋白多肽的提取工藝和魚(yú)鱗ACE抑制肽的制備工藝;建立食源性ACE抑制肽體外活

3、性的檢測(cè)方法;利用多級(jí)膜分離技術(shù)分離純化魚(yú)鱗蛋白多肽;運(yùn)用多種檢測(cè)技術(shù)研究魚(yú)鱗ACE抑制肽的理化性質(zhì)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定魚(yú)鱗ACE抑制肽的抑制活性。該方法具有良好的精密度和重復(fù)性,在1～200μ g·ml-1濃度范圍內(nèi),馬尿酸的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系(R2=0.9999),最低檢測(cè)限為0.5μ g·ml-1,對(duì)馬尿酸的回收率為99.46～101.19％,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為

4、0.55％(n=9)。
　　 2.分析狗母魚(yú)魚(yú)鱗原料的化學(xué)成分,確定魚(yú)鱗蛋白質(zhì)含量為39％,疏水氨基酸占總氨基酸的33.59％,是制備ACE抑制肽優(yōu)良的蛋白質(zhì)源。
　　 3.選擇10種特異性蛋白酶提取魚(yú)鱗蛋白多肽,以蛋白質(zhì)提取率作為主要的評(píng)價(jià)指標(biāo),水解度為輔助評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選出胃蛋白酶為提取魚(yú)鱗蛋白多肽的特異性蛋白酶。運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化魚(yú)鱗蛋白多肽的提取工藝,研究了溫度、pH、時(shí)間和酶與底物濃度比對(duì)魚(yú)鱗蛋白多肽提取效果的影響

5、,確定酶解的最佳工藝條件:酶添加量0.90％、溫度51℃、pH值1.1、時(shí)間5.1h、料液比1:10,魚(yú)鱗蛋白多肽蛋白質(zhì)提取率達(dá)72.77％。
　　 4.利用陶瓷膜、反滲透膜和電滲析集成的多級(jí)膜分離技術(shù)分離純化魚(yú)鱗蛋白肽,魚(yú)鱗蛋白多肽的得率為78.67％。
　　 5.以純化后的魚(yú)鱗蛋白多肽為原料,以ACE抑制活性為主要的評(píng)價(jià)指標(biāo),水解度為輔助評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),篩選出中性蛋白酶為制備ACE抑制肽的特異性蛋白酶。運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化魚(yú)鱗

6、ACE抑制肽的制備工藝,研究溫度、pH、時(shí)間和酶與底物濃度比對(duì)魚(yú)鱗ACE抑制肽ACE活性和水解度的影響,確定制備ACE抑制肽的最佳工藝條件為溫度47℃,底物濃度4％,酶與底物濃度比3.2％,pH值7.0,水解時(shí)間為170min,制各樣品ACE抑制活性IC50值為0.16mg·ml-1。
　　 6.魚(yú)鱗ACE抑制肽的理化性質(zhì)研究表明樣品的蛋白質(zhì)含量為92.46±0.05％,水分含量為5.46±0.13％,灰分含量為1.98±0.2