魔芋ACE抑制肽制備技術(shù)及理化性質(zhì)研究.pdf

1、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（Angiotensin I-Converting Enzyme，ACE）抑制肽是一種對(duì)ACE活性具有抑制作用的多肽，一般由2～20個(gè)氨基酸殘基組成。ACE抑制肽通過與ACE發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，能阻斷血管緊張素Ⅱ生成、促進(jìn)舒緩肽和腦啡肽生成，從而起到降壓作用。目前，已有從綠豆、大豆、酪蛋白、牛乳、麥胚蛋白、牡蠣等原料中制備ACE抑制肽的報(bào)道，而以魔芋為原料制備ACE抑制肽的資料甚少。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，富含蛋白的魔芋飛粉經(jīng)過酶法降

2、解可產(chǎn)生支鏈氨基酸寡肽、ACE抑制肽、高F值寡肽、甘露聚糖肽等活性肽。對(duì)魔芋飛粉這一天然藥物資源進(jìn)行研究開發(fā)，有望為ACE抑制肽的制備開辟一條綠色的新途徑。
　　本文以魔芋飛粉為原料，采用酶解法制備魔芋ACE抑制肽，依次通過超濾及大孔吸附樹脂對(duì)制備的ACE抑制肽分離純化，并對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)及理化性質(zhì)分析。研究結(jié)果如下：
　　1.魔芋ACE抑制肽酶解法制備：以ACE抑制率為指標(biāo)，通過對(duì)預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出的胃蛋白酶酶解制備魔芋ACE抑

3、制肽的工藝進(jìn)行單因素考察和正交優(yōu)化，得到最佳酶解工藝條件為：底物濃度2％、酶用量5000U/g、溫度37℃、pH2.5、酶解時(shí)間210min，此時(shí)酶解液的ACE抑制率為92.65%、多肽得率為12.60%。
　　2.超濾法分離魔芋ACE抑制肽：以ACE抑制率為指標(biāo)，預(yù)選出最佳超濾膜的截留分子量為1kDa。單因素考察及正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化得到的最佳超濾條件為：在多肽液濃度2%、pH4.0、溫度40℃的條件下，采用1kDa的超濾膜超濾15mi

4、n，產(chǎn)物的ACE抑制率可達(dá)到92.75%。
　　3.大孔吸附樹脂分離魔芋ACE抑制肽：以吸附率和解吸率為指標(biāo)，通過對(duì)預(yù)選出的DA201-C型大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附-解吸工藝實(shí)驗(yàn)，確定出最佳吸附工藝條件為：上樣液質(zhì)量濃度8mg/mL、pH2.0、上樣量8mL、上樣流速0.5mL/min；解吸工藝條件為：洗脫液乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、洗脫流速1.0mL/min、洗脫時(shí)間2h。在此條件下，得到的魔芋ACE抑制肽的抑制率為95.19%。

5、　　4.紅外光譜分析：對(duì)分離純化后的魔芋ACE抑制肽及ACE抑制肽標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行紅外光譜掃描，結(jié)果表明，二者的峰形和峰值大體一致，均存在O-H、N-H、酰胺鍵、C-O、芳烴的C-H彎曲振動(dòng)等。綜合分析結(jié)果，魔芋ACE抑制肽與標(biāo)準(zhǔn)品紅外光譜特征基本一致。
　　5.采用紫外全波長(zhǎng)掃描對(duì)魔芋ACE抑制肽進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在220nm處有最大吸收峰，與ACE抑制肽標(biāo)準(zhǔn)品基本一致。高效液相色譜法分析結(jié)果表明，魔芋ACE抑制肽與標(biāo)準(zhǔn)品峰形特征相似。紫

6、外分光光度法檢測(cè)出純化后樣品中魔芋ACE抑制肽含量為81.37%。凝膠滲透色譜法測(cè)定出魔芋ACE抑制肽的峰值分子量(MP)為655Da，分子量范圍為500～700Da。
　　6.魔芋ACE抑制肽理化性質(zhì)分析：分離純化后得到的魔芋ACE抑制肽為灰白色固體粉末，有腥臭味；室溫下pH2.0時(shí)在水中的溶解率可達(dá)95%左右；30～50℃下穩(wěn)定性較好，但90℃水浴下5h后其ACE抑制率幾乎為零；在pH2.0～4.0范圍內(nèi)室溫放置2h ACE抑