甘油運輸?shù)鞍缀透视兔摎涿高^表達對二羥基丙酮生產(chǎn)的影響.pdf

1、二羥基丙酮(DHA)是最簡單的酮糖，由于化學(xué)性質(zhì)活潑，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、化工、化妝品行業(yè)。DHA的工業(yè)化生產(chǎn)主要以甘油為底物，通過氧化葡萄糖酸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)。氧化葡萄糖酸桿菌是一種好氧型革蘭氏陰性桿菌。生產(chǎn)DHA的過程中，主要有三種制約因素：底物抑制、產(chǎn)物抑制和溶氧。為了提高DHA的生產(chǎn)效率，本論文通過同源過量表達甘油運輸?shù)鞍状龠M菌體生長，提高甘油耐受性，同時過量表達甘油脫氫酶，構(gòu)建利于DHA生產(chǎn)的氧化葡萄糖酸桿菌工程菌，主要內(nèi)容

2、如下：
　　1.甘油運輸?shù)鞍自诰w內(nèi)的過量表達及其對菌體生長的影響
　　本文構(gòu)建了含有四種不同啟動子的甘油運輸?shù)鞍谆颍╣lpF）的重組載體，導(dǎo)入到氧化葡萄糖酸桿菌，進行了同源過量表達分析。實驗結(jié)果表明，glpF自身完整啟動子、tufB啟動子、自身部分啟動子、gmr啟動子控制下的甘油運輸?shù)鞍椎霓D(zhuǎn)錄水平分別是原始菌的10倍、10倍、5倍和3倍，當(dāng)在100 g/L甘油濃度時，其最終生物量OD600分別為4.8、4.7、4.2、3

3、.5，而原始菌僅為2.5。隨著甘油濃度的升高，原始菌生長受到嚴重抑制，250 g/L甘油時，原始菌基本停止生長，而4株工程菌則可以緩慢存活。從而得出，glpF的表達有效提高了菌體對甘油的耐受性。
　　2.甘油脫氫酶在菌體內(nèi)的過表達及其對細胞生長和DHA產(chǎn)量的影響
　　本實驗采用tufB啟動子和甘油脫氫酶自身啟動子控制甘油脫氫酶基因的過量同源表達分析。實驗結(jié)果表明，tufB啟動子和自身啟動子控制下的甘油脫氫酶的表達量基本相同，

4、為原始菌的5倍左右，甘油脫氫酶的酶活也由原始菌的1.74 U/mg分別升高到2.25 U/mg和2.14 U/mg。在過量表達甘油脫氫酶后，重組菌在種子培養(yǎng)基和100 g/L甘油培養(yǎng)基中的生長與原始菌基本相同。當(dāng)在100 g/L甘油濃度下時，重組菌株DHA的產(chǎn)量比原始菌株提高了12.5％。
　　3甘油運輸?shù)鞍缀透视兔摎涿冈诩毎麅?nèi)的雙過表達及其對DHA生產(chǎn)的影響
　　為了提高DHA的產(chǎn)量，我們在菌體內(nèi)同時過表達甘油運輸?shù)鞍缀透?/p>