酪蛋白組分分離、純化研究.pdf

1、牛乳含有豐富優(yōu)質(zhì)全價的營養(yǎng)成分，是易消化吸收的天然食物。其中蛋白質(zhì)含量為30～35g/L，大約80％為酪蛋白（26g/L），其余的20％為乳清蛋白（6g/L）。酪蛋白是在20℃的條件下將脫脂乳用酸調(diào)節(jié)pH4.6時沉淀的蛋白質(zhì)。酪蛋白的主要成分是α s1-酪蛋白、α s2-酪蛋白、β-酪蛋白、k-酪蛋白。它們在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上存在著顯著的差異且具有廣泛的用途，如用于開發(fā)嬰兒配方乳，生產(chǎn)酪蛋白源生物活性肽，生產(chǎn)出功能特性更強的蛋白質(zhì)，優(yōu)化奶酪和

2、奶酪風味物質(zhì)的生產(chǎn)過程等。由于酪蛋白分級分離產(chǎn)物的功能眾多，其分離純化制備工作也是關(guān)注的焦點，本文的目的就是以干酪素為原料，研究酪蛋白分級分離的方法，以期將酪蛋白主要成份α s-酪蛋白、β-酪蛋白和k-酪蛋白分離制取，使酪蛋白的使用領(lǐng)域增大，實用性增強和產(chǎn)品附加值提高并有利于各種乳及乳制品的深加工和資源利用。實驗主要由四個部分組成。
　　 第一部分，以SinoChrom300A C8柱為分離柱，建立了高效液相色譜法測定酪蛋白組分

3、的方法。結(jié)果表明，干酪素樣品用含2％巰基乙醇和1％的檸檬酸鈉的7M的尿素溶液處理后，以水（內(nèi)含體積分數(shù)為0.1％TFA）和乙腈（內(nèi)含體積分數(shù)為0.1％TFA）分別為流動A相和B相，在梯度洗脫流速1.0mL/min，檢測波長214nm條件下，酪蛋白組分能被有效分離且具有較大的響應(yīng)值，線性關(guān)系良好，峰面積和保留時間具有良好的穩(wěn)定性，加樣回收率較好，建立的方法切實可行。
　　 第二部分，以Q-Sepharose Fast Flow為離

4、子交換介質(zhì)，以干酪素為原料，對其直接用于酪蛋白組分的分離進行了研究。首先確定了其吸附pH，吸附容量，接著討論了流速，洗脫程序?qū)Ψ蛛x的影響，最終結(jié)果為流動相：A相為含4M尿素、0.5％ME，pH8.0的20mM的Tris-HCl緩沖液，B相為含2M氯化鈉的A相溶液，pH仍為8，洗脫流速1ml/min，檢測波長280nm。以分步洗脫為洗脫方式，該洗脫程序能夠?qū)崿F(xiàn)各酪蛋白的初步富集，并為進一步的分離打下基礎(chǔ)。
　　 第三部分，研究了尿

5、素沉淀法分離酪蛋白的條件，分析了尿素濃度、酪蛋白濃度、沉淀溫度對分離的影響。先進行單因素試驗，再在各單因素最佳水平值的基礎(chǔ)上，通過L9（34）正交實驗結(jié)果確定了溫度、酪蛋白濃度、尿素濃度這幾個因素的最佳水平值組合得沉淀溫度40℃，酪蛋白濃度6％，尿素濃度3.2mol/L。然后將尿素沉淀法與離子交換層析法接合對干酪素進行分級分離，最終得k-酪蛋白的相對純度57.3％，回收率49.8％；Q s-酪蛋白相對純度75.4％，回收率73.8％；β