缺氧誘導(dǎo)因子HIF-2a對NCI-H226細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　腫瘤細(xì)胞在快速生長時，血液的供養(yǎng)就會降低，當(dāng)缺氧達(dá)到3％的時候，就會誘發(fā)缺氧微環(huán)境，產(chǎn)生一種叫缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)的介導(dǎo)來保護(hù)機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，缺氧所造成的一系列反應(yīng)過程和很多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過探討HIF-2a的表達(dá)是否對肺癌細(xì)胞（人肺鱗癌細(xì)胞系NCI-H226細(xì)胞株）增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等方面產(chǎn)生影響，從而發(fā)現(xiàn)靶向抑制HIF-2a對NSCLC可能的治療作用

2、。
　　方法：
　　1、HIF-2a-shRNA干擾質(zhì)粒的構(gòu)建及篩選，實(shí)驗(yàn)采用脂質(zhì)體（Lipofect emin2000）將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NCI-H226細(xì)胞，建立陽性組（HIF-2a干擾質(zhì)粒組）和陰性對照組（空質(zhì)粒組），放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h，用綠色熒光顯微鏡觀察并拍照，計(jì)算轉(zhuǎn)染效率，提取蛋白用Western Blot蛋白印跡法驗(yàn)證HIF-2a表達(dá)的抑制效果。
　　2、建立人肺癌細(xì)胞系NCI-H226細(xì)胞不同時相段

3、缺氧培養(yǎng)模型，誘導(dǎo)HIF-2a表達(dá)，用Wes tern Blot蛋白印跡法驗(yàn)證NCI-H226中HIF-2a的表達(dá)情況。
　　3、HIF-2a對NCI-H226細(xì)胞生物學(xué)行為的影響（MTT法檢測細(xì)胞增殖情況，Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力）。
　　結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建的shRNA HIF-2表達(dá)載體。
　　2、缺氧條件下NCI-H226細(xì)胞表達(dá)HIF-2a。
　　3、抑制HIF-