P2X7受體在大鼠神經(jīng)痛疼痛機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：P2X7受體是一種ATP門控的非選擇性陽離子通道受體,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞上,而在外周神經(jīng)系統(tǒng)的背根神經(jīng)節(jié)(DorsalRootGanglion,DRG)內(nèi)表達(dá)在衛(wèi)星細(xì)胞上。其激活后可引起Na+,Ca2+的內(nèi)流以及K+離子的外流,同時調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)IL-1β的成熟和釋放。雖然近年來已有少量文獻(xiàn)報道,P2X7受體與神經(jīng)痛模型疼痛的發(fā)生密切相關(guān),但是對于P2X7受體在神經(jīng)痛疼痛發(fā)生機(jī)制中的作用仍然不是很清楚。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)

2、用脊神經(jīng)高位結(jié)扎(SpinalNerveLigation,SNL)神經(jīng)痛模型大鼠,運(yùn)用免疫熒光、ELISA技術(shù)來探討P2X7受體在神經(jīng)痛疼痛發(fā)生機(jī)制中的作用。
　　 方法：制作SNL大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型,測定疼痛閾值的經(jīng)時變化過程,以便進(jìn)行后續(xù)研究。采用蛛網(wǎng)膜下腔給藥的方法,將P2X7受體特異性拮抗劑考馬斯亮藍(lán)(BrilliantBlueG,BBG)注射到SNL模型大鼠體內(nèi),每日一次,每次10μL(10μM),連續(xù)7日。同時,

3、使用WonFreyFilament來測定大鼠機(jī)械性痛閾的變化情況。然后,取大鼠腰骶膨大處脊髓和LA,L5,L6DRG,運(yùn)用免疫熒光技術(shù)觀察大鼠脊髓背角上的星形膠質(zhì)細(xì)胞以及DRG上衛(wèi)星細(xì)胞的激活情況。最后,運(yùn)用ELISA技術(shù)檢測大鼠腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)IL-1β的蛋白含量。
　　 結(jié)果：SNL大鼠機(jī)械性痛閾經(jīng)時曲線顯示,手術(shù)后第3天大鼠術(shù)側(cè)腳出現(xiàn)疼痛行為,此疼痛行為可一直持續(xù)四周,其中第5天到第15天這段時間內(nèi)疼痛最為敏感和穩(wěn)定,

4、縮足閾(PawWithdrawThreshold,PWT)≤4g。而SNL大鼠手術(shù)對側(cè)腳和正常組大鼠則無疼痛行為發(fā)生。隨后,選取SNL大鼠疼痛最敏感和最穩(wěn)定的時期,將SD大鼠分為5組,即模型組(SNL手術(shù))、陽性組(SNL術(shù)后注射BBG)、陰性對照組(SNL術(shù)后注射生理鹽水)、正常組(無任何處理)和假手術(shù)組。陰性對照組大鼠在第3天、第5天、第7天的縮足閾分別為4.77±1.33g,4.22±1.02g,4.04±1.67g,與模型組大鼠

5、相比無顯著性差異,而陽性組大鼠在以上時間點(diǎn)的PWT則顯著升高,分別為8.28±1.57g、7.9±2.12g、7.12±1.38g。在免疫熒光試驗(yàn)中,可觀察到鞘內(nèi)注射BBG第7天,陽性組大鼠手術(shù)同側(cè)腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)以及L5DRG內(nèi)GFAP的表達(dá)量與陰性對照組和模型組相比都有所下降;在ELISA試驗(yàn)中,可觀察到鞘內(nèi)注射BBG第7天,陽性組大鼠腰骶膨大處脊髓背角內(nèi)IL-1β的蛋白含量與陰性對照組相比下降了32％。
　　 結(jié)論：在