炎癥反應(yīng)中P2X7受體與NALP3的相關(guān)性及機制研究.pdf

1、　　目的：檢測脂多糖(LPS)與三磷酸腺苷(ATP)處理單核細(xì)胞THP-1模擬炎癥反應(yīng)后P2X7受體與NALP3表達(dá)情況,了解P2X7受體及NALP3的相互關(guān)系；同時用鉀離子拮抗劑格列本脲、Pannexin-1拮抗劑CBX及青蒿琥酯處理對照組與實驗組,進(jìn)一步探討P2X7受體影響NALP3表達(dá)的可能機制。
　　方法：(1) FCM檢測炎癥反應(yīng)中細(xì)胞THP1表達(dá)P2X7受體及NALP3的情況。(2)MTT法檢測LPS、ATP處理細(xì)胞

2、后細(xì)胞生長及凋亡情況,選擇最適作用濃度。(3) qPCR、FCM、Western blotting分別檢測LPS、ATP處理細(xì)胞模擬炎癥反應(yīng)后,P2X7、NALP3表達(dá)的變化,同時通過格列本脲、CBX及青蒿琥酯分析P2X7影響NALP3及IL-1的可能機制。
　　結(jié)果：(1)LPS與ATP共同作用細(xì)胞后,P2X7與NALP3的表達(dá)明顯高于單個藥物的處理(2)鉀離子拮抗劑格列本脲處理已用LPS孵育過的細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)P2X7受體與NAL

3、P3表達(dá)變化不大；但作用ATP孵育或LPS與ATP共同孵育過的細(xì)胞,P2X7受體與NALP3表達(dá)明顯降低(3)Pannexin-1拮抗劑CBX處理LPS單獨處理的細(xì)胞,P2X7受體與NALP3表達(dá)變化不大；但作用ATP孵育或LPS與ATP共同孵育過的細(xì)胞,P2X7受體與NALP3表達(dá)明顯降低(4)青蒿琥酯處理ATP單獨處理細(xì)胞,P2X7受體與NALP3表達(dá)變化不大；但作用LPS孵育或LPS與ATP共同孵育過的細(xì)胞,P2X7受體與NALP

4、3表達(dá)明顯降低(5)格列本脲、CBX與青蒿琥酯共同處理LPS與ATP共同孵育過的細(xì)胞, P2X7受體與NALP3表達(dá)降低
　　結(jié)論：炎癥反應(yīng)中P2X7受體與NALP3均有表達(dá),并且在ATP的持續(xù)刺激下,P2X7受體與NALP3均明顯升高,但當(dāng)用鉀離子拮抗劑格列本脲或Pannexin-1拮抗劑CBX處理,其表達(dá)明顯降低,說明P2X7受體可能是通過鉀離子通道或Pannexin-1非特異孔道調(diào)節(jié)NALP3炎癥小體；用青蒿琥酯、格列本脲