微囊化成骨細胞支持臍血造血干-祖細胞擴增的研究.pdf

1、臍血(cord blood，CB)中富含寶貴的造血干/祖細胞(hematopoietic stem/progenitorcell，HSPC)，具有重要的臨床應用價值。但由于單份臍血只有50-100ml，只夠體重30kg以下兒童使用，使其移植應用受到限制。目前的體外擴增手段無法避免HSPC的過度分化，輸入體內后效果不能令人滿意。 成骨細胞(osteoblasts，OB)作為骨髓中造血干細胞微環(huán)境(hematopoietic ste

2、m cellniche)的主要成分，能夠支持HSPC擴增，但作用機制尚不明確。而且，目前的培養(yǎng)方式，無論是直接接觸培養(yǎng)還是應用Transwell板培養(yǎng)，都由于基質細胞貼壁的面積有限而使HSPC擴增受到限制。 為了提高HSPC的有效擴增倍數，同時探討成骨細胞支持HSPC擴增的機理，本文將成骨細胞包埋在明膠-海藻酸鈉-殼聚糖(gelatin-alginate-chitosan，GAC)微珠中，與HSPC在無血清、含少量生長因子組合的

3、IMDM培養(yǎng)基中進行共培養(yǎng)。每天取樣計細胞數，同時檢測葡萄糖、乳酸等代謝產物含量變化，并檢測培養(yǎng)前后CD34+細胞數和集落擴增倍數。分別考察氧分壓、微珠直徑、細胞比率這三個關鍵培養(yǎng)參數對支持HSPC擴增和維持其干細胞性質的作用，篩選最佳培養(yǎng)參數。并考察不同培養(yǎng)條件下成骨細胞分泌IL-6和LIF等細胞因子的量與造血細胞擴增效果的關系。 結果表明，5％氧分壓、直徑0.5mm、細胞比率(OB:HSPC)=2:l時的擴增效果最好，造血總

4、細胞可以有49.0±4.6-fold的擴增，同時，CD34+細胞擴增了87.6±8.3-fold，CFU-Cs集落擴增了9.8±0.8-fold。對不同條件下成骨細胞分泌的IL-6、LIF、SCF等細胞因子研究的結果表明，造血細胞擴增倍數高低與成骨細胞IL-6分泌量有關，CD34+細胞的擴增倍數與干細胞特性的維持及LIF等因子分泌量有關，這說明成骨細胞體外對造血干/祖細胞的支持主要是通過分泌細胞因子起作用的。 本文采用成骨細胞微