MicroRNA-375、MicroRNA-205在肺癌中的表達及相關靶基因的研究.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是一類長度約～22nt的內源性非編碼單鏈小分子RNA。miRNA主要通過與靶基因mRNA堿基互補配對——通常為miRNA的5'種子序列(5'seed sequence)與mRNA的的3'非翻譯區(qū)(3'untranslated region，3'UTR)——在轉錄后水平調節(jié)蛋白編碼基因的表達。miRNA通過對基因表達的調節(jié)，參與發(fā)育分化、細胞增殖、凋亡等重要生命過程。越來越多的miRNA被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中表達

2、失調，包括肺癌，提示miRNA與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。目前認為miRNA對腫瘤進程中的多個階段均有重要影響，包括原癌基因的激活與抑制，腫瘤生長，腫瘤血管生成，侵襲轉移等等。
　　肺癌一直是世界上最常見的惡性腫瘤死亡原因。病理學分類上主要將肺癌分為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLCs)和小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLCs)。不同病理學類型的肺癌其治療手段也存

3、在差異。由于當前對肺癌發(fā)生發(fā)展機制的研究仍不夠深入，臨床的治療方法相對落后。因此有必要尋找新的分子標記物，為肺癌的診斷和治療提供更有效的靶點，以期改善肺癌患者的預后。
　　本課題中，我們首先采用實時熒光定量RT-PCR(quantitative RT-PCR，qRT-PCR)在207例肺癌和正常肺組織石蠟標本中對microRNA-205(miR-205)和microRNA375(miR-375)的表達進行驗證。結果顯示，與正常肺組

4、織相比，miR-205在肺鱗癌(squamous cell lung carcinoma，SQ)中表達明顯上調(P＜0.05)，而miR-375在SCLC中顯著上調(P＜0.05)。進一步我們預測篩選二者的靶基因，采用miRecords靶基因預測軟件并結合KEGG信號通路數(shù)據(jù)庫，在22個肺癌相關信號通路中預測得到52個miR-205的候選靶基因，以及22個miR-375的候選靶基因。
　　考慮到miR-375在SCLC組織樣本中的

5、顯著上調，而當前對miR-375相關的信號通路及其在肺癌中的研究相對較少，我們進一步選擇miR-375作為更深入的研究對象。首先通過qRT-PCR在85例手術切除冰凍組織標本中對miR-375的22個候選靶基因作驗證，結果得到16個候選靶基因(ACSL3，F(xiàn)ZD8，ITGA10，ITPKB，LRP5, PIAS1,CACNG2, CCDC6,JUND, RYR2, CSNK2A1, MAP3K5, RUNX1, NLK, PDPK1,S

6、P1）在肺癌中的表達與正常肺組織中的表達相比具有差異。其中6個候選靶基因(FZD8，ITGA10，ITPKB，LRP5，PIAS1，RUNX1)mRNA的表達與miR-375的表達呈負相關，我們進一步選擇這6個候選靶基因作后續(xù)的體外細胞實驗。
　　有意思的是，在3株SCLC細胞系(NCI-H345，H69，H82)中發(fā)現(xiàn)PIAS1蛋白的內源性表達與miR-375的內源性表達呈負相關。此外，miR-375可以抑制野生型PIAS1 m

7、RNA3，UTR的報告基因活性，而對結合位點突變的突變型PIAS13'UTR的報告基因活性沒有明顯影響，為證實PIAS1作為miR-375的靶基因提供了有力的依據(jù)。
　　綜上所述，本研究在肺癌患者中證實了miR-205這一SQ特異性分子標記物以及miR-375這一SCLC特異性分子標記物。miR-375通過作用于靶基因PIAS13'UTR，在轉錄后水平調節(jié)PIAS1的表達。這些結果提示miR-375在SCLC發(fā)病分子機制中具有重要