ESM-1在腎移植急性排斥中的檢測和臨床意義.pdf

1、得益于組織配型及強(qiáng)力免疫抑制劑的應(yīng)用，腎移植成為臨床治療終末期腎病的主要方法，但排斥反應(yīng)仍然是長期未解的難題。供、受者完全耐受仍然是一個(gè)理想的目標(biāo)。急性排斥反應(yīng)(AR)的發(fā)生，不僅直接關(guān)系到移植的成敗，甚至早期摘除移植器官。而且與移植物長期存活及慢性排斥反應(yīng)(CR)的發(fā)生相關(guān)。 目前對(duì)AR的診斷，主要依據(jù)受者的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、病理活檢及治療反應(yīng)。病理活檢是目前明確診斷排斥反應(yīng)的金標(biāo)準(zhǔn)，但存在有創(chuàng)操作、取材不便等不足，并且臨

2、床上經(jīng)常出現(xiàn)因診斷需要而再三穿刺活檢的情況，這顯然不為臨床醫(yī)生和患者所接受。有鑒于此，許多學(xué)者致力于開發(fā)快速、早期、敏感、可反復(fù)進(jìn)行、重復(fù)性好的診斷AR新方法。方法雖然很多，但均存在許多缺陷，如影響因素多、個(gè)體差異大、特異性和敏感性差別大等。因此尋求敏感特異的非侵襲性診斷指標(biāo)，對(duì)于預(yù)測和診斷排斥反應(yīng)及其轉(zhuǎn)歸，制定個(gè)體化免疫抑制方案均具有重要意義。 血管內(nèi)皮細(xì)胞(EC)是血液與組織間的重要屏障，是器官移植后供、受者細(xì)胞間最早接觸的

3、場所，最早被免疫系統(tǒng)識(shí)別，且具備獨(dú)特的生物學(xué)功能，在移植排斥反應(yīng)中有重要作用。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，排斥反應(yīng)時(shí)受體白細(xì)胞在經(jīng)過一系列活化過程后滲透入移植物；同時(shí)，移植物白細(xì)胞也從血管遷徙至受體淋巴結(jié)。上述步驟中，從白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附開始即發(fā)生細(xì)胞粘連與滾動(dòng)、啟動(dòng)粘附、緊密粘附和遷徙等生物行為過程，EC在每一個(gè)步驟中均發(fā)揮重要的作用。 存在于外周血液循環(huán)中的內(nèi)皮細(xì)胞，稱為循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(CECs)。是源于血管內(nèi)皮的脫落細(xì)胞，反映血管內(nèi)皮損傷、

4、衰老及再生的動(dòng)態(tài)過程，是目前活體內(nèi)特異而直接地反映血管損傷的標(biāo)志物，在很多血管損傷性疾病中顯著升高，能反映不同血管性疾病內(nèi)皮細(xì)胞的功能及代謝等的變化。ElianeR等發(fā)現(xiàn)，在急性排斥反應(yīng)時(shí)，外周血中CEC數(shù)量明顯增加，認(rèn)為腎移植患者血中CEC主要來源于供。腎，可以反映移植。腎的血管損傷程度。 ESM-1，又叫內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子，是毛細(xì)血管、小動(dòng)脈、小靜脈等血管組織的共同特征性分子，可在許多正常組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。文獻(xiàn)報(bào)道ES

5、M-1分子高度限制在內(nèi)皮細(xì)胞，可能參與內(nèi)皮細(xì)胞的活動(dòng)，在內(nèi)皮細(xì)胞依賴的病理性過程中發(fā)生作用，因此認(rèn)為ESM-1可以作為內(nèi)皮細(xì)胞激活的新標(biāo)志物。本課題采用隨機(jī)對(duì)照的方法觀察了ESM-1在腎移植術(shù)后患者外周血循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞以及腎組織的表達(dá)及變化，并在大鼠腎移植模型中觀察不同免疫狀態(tài)下ESM-1的表達(dá)及變化，最后就ESM-1的監(jiān)測在腎移植急性排異反應(yīng)診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了探討。 主要研究內(nèi)容： 1.通過檢測腎移植術(shù)后急性排斥

6、反應(yīng)患者及正常人外周血CECs中的ESM-1mRNA及移植腎組織中ESM-1蛋白表達(dá)，了解ESM-1的變化是否能夠反映內(nèi)皮細(xì)胞的受損狀態(tài)及腎移植術(shù)后排斥反應(yīng)的進(jìn)程。與傳統(tǒng)的AR診斷指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，探討ESM-1的變化在AR診斷中的應(yīng)用價(jià)值。 2.建立雙側(cè)供腎大鼠腎移植急排模型，觀察術(shù)后移植腎功能及病理變化并為第三部分實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。 3.采用隨機(jī)對(duì)照的方法，在大鼠腎移植模型中，通過聯(lián)合應(yīng)用藥物誘導(dǎo)HO-1增加，觀察HO

7、-1表達(dá)增加是否可以改善移植腎內(nèi)皮細(xì)胞功能、減輕移植腎病理損害。并在Hemin干預(yù)治療后對(duì)ESM-1進(jìn)行檢測，觀察是否可以反映內(nèi)皮細(xì)胞的損傷、變化情況。并對(duì)ESM-1的臨床應(yīng)用價(jià)值展開探討。 主要結(jié)果： 1.腎移植病人術(shù)前ESM-1mRNA表達(dá)時(shí)為3.47±1.05，術(shù)后發(fā)生排斥反應(yīng)時(shí)ESM-1mRNA表達(dá)明顯增加，最高為11.38±2.35。急排病人ESM-1蛋白表達(dá)為0.32±0.06，較正常腎臟ESM-1蛋白表達(dá)(

8、0.18±0.04)明顯提高(Western-blot法)。 2.動(dòng)態(tài)監(jiān)測移植腎功能正常組的外周血ESM-1mRNA表達(dá)較術(shù)前有所升高，但變化不明顯。 3.因急性腎小管壞死、外科原因等因素引起移植腎功能不全的患者，動(dòng)態(tài)監(jiān)測其外周血ESM-1較術(shù)前有所升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.雙側(cè)供腎手術(shù)方法采用標(biāo)準(zhǔn)顯微外科技術(shù)，獨(dú)自一人完成，手術(shù)成功率較高。與單側(cè)供腎術(shù)式相比，兩組取腎時(shí)間有顯著差異，其余耗時(shí)以及移植腎功能、移

9、植腎病理、術(shù)后存活時(shí)間等方面無顯著差異。從而達(dá)到了節(jié)省實(shí)驗(yàn)費(fèi)用、縮短手術(shù)時(shí)間的目的。 5.應(yīng)用Hemin干預(yù)治療后，大鼠移植腎組織HO-1蛋白的表達(dá)及活性明顯增強(qiáng)(最高為8.63±1.26nmol/mg.min)。移植腎組織細(xì)胞凋亡率降低(19.52±2.73％)。移植腎病理損害程度比急性排斥反應(yīng)組輕，但比CsA組病理表現(xiàn)更嚴(yán)重。 6.腎移植術(shù)后大鼠外周血ESM-1mRNA及移植腎組織中ESM-1蛋白表達(dá)增加，發(fā)生排斥反

10、應(yīng)的大鼠ESM-1mRNA表達(dá)顯著增加。應(yīng)用Hemin藥物干預(yù)治療后，發(fā)現(xiàn)ESM-1表達(dá)下降。 主要結(jié)論： 1.ESM-1具有高度的內(nèi)皮細(xì)胞特異性，外周血ESM-1mRNA及移植腎組織ESM-1蛋白表達(dá)變化可反應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度。 2.ESM-1可作為AR的預(yù)測及診斷指標(biāo)，具有高度敏感性及特異性。 3.聯(lián)合應(yīng)用藥物誘導(dǎo)HO-1增加后可以減少移植腎細(xì)胞凋亡、改善移植腎內(nèi)皮細(xì)胞功能并減輕移植腎病理損害。