S100A4基因對胃癌細胞生物學特性的影響及機制探討.pdf

1、目的： 胃癌是我國常見的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展乃至侵襲轉移是一個多基因改變、多因素參與的多步驟復雜過程，雖然進行了大量研究，但其分子機制還遠不清楚。S100A4是Ca<'+>結合蛋白S100家族的成員之一，研究表明它降低腫瘤細胞間黏附能力、促進細胞外基質水解和重塑、增強腫瘤細胞運動能力、促進血管生成，在轉移過程中發(fā)揮關鍵性作用<'[1-5]>。前期實驗證實了S100A4基因與胃癌浸潤、淋巴結轉移及胃癌細胞體外侵襲力等特性密切相關

2、，但是S100A4基因在胃癌中的作用及表達調(diào)控機制尚不清楚。因此我們采用RNA干涉技術抑制BGC823細胞中S100A4基因表達，分析細胞凋亡、增殖等改變及其分子機制。近年來腫瘤的微環(huán)境與其侵襲轉移的關系倍受關注，尤其是腫瘤微環(huán)境低氧，低氧增加基因組不穩(wěn)定性及基因組異質性并通過表觀遺傳方式調(diào)控基因表達。我們前期應用生物信息學方法在S100A4基因內(nèi)含子中發(fā)現(xiàn)了HIF-1反應元件的核心序列，推測研究微環(huán)境低氧可能上調(diào)S100A4基因表達。

3、因此本課題將對胃癌細胞BGC823進行低氧處理，觀察其對S100A4基因表達的影響。對上述問題的研究不僅有助于揭示胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制，而且對胃癌診斷、治療也將具有重要指導意義。 材料與方法： 1、實驗材料：胃癌細胞系BGC823、pSilencerTM 4.1-CMV neo vector表達載體、RPMT1640培養(yǎng)基、TRIZOL Reagent、Taq DNA聚合酶、反轉錄試劑盒、質粒提取試劑盒、脂質體轉染試劑

4、盒、JM109感受態(tài)細胞、S100A4/NF-γ B抗體。 2、實驗方法： (1)細胞培養(yǎng)：胃癌細胞系BGC823細胞，細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為37℃、5％CO<,2>，實驗采用對數(shù)生長期細胞。 (2)針對S100A4基因設計siRNA，采用重組DNA技術構建S100A4特異性shRNA表達載體，轉染胃癌細胞，RT-PCR、W