三維培養(yǎng)兔自體關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1．掌握軟骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)技術(shù)，掌握自體關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的建立及自體軟骨細(xì)胞移植加骨膜覆蓋技術(shù)。 2．研究了解在體外三維培養(yǎng)條件下的軟骨細(xì)胞，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的短期修復(fù)效果。 3．為臨床開展自體軟骨細(xì)胞移植，治療關(guān)節(jié)軟骨損傷提供一個(gè)基礎(chǔ)性研究。 方法： 1．自體軟骨細(xì)胞的來源取四周齡新西蘭兔，腹腔全麻后，無菌條件下片狀切取一側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨髁部軟骨，用機(jī)械和酶消化法獲得單個(gè)軟骨細(xì)胞，細(xì)胞懸

2、液，進(jìn)行體外三維培養(yǎng)。 2．自體軟骨細(xì)胞的移植取三維培養(yǎng)的自體膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，消化成單個(gè)軟骨細(xì)胞后，將細(xì)胞懸液注入兔膝關(guān)節(jié)缺損處，采用自體同側(cè)脛骨上端內(nèi)側(cè)骨膜覆蓋。 3．試驗(yàn)分組：按試驗(yàn)方法分為四組：白體軟骨細(xì)胞移植組、自體對(duì)照組(單純骨膜覆蓋)、異體對(duì)照組(單純骨膜覆蓋)及異體對(duì)照組(無骨膜覆蓋)。按動(dòng)物數(shù)量分組：選24只健康新西蘭大白兔，體重為2.0～2.5 kg，隨機(jī)分為4組，每組6只。 4．試驗(yàn)用關(guān)節(jié)軟骨

3、缺損模型設(shè)計(jì)：試驗(yàn)組及自體對(duì)照組：于兔左膝關(guān)節(jié)股骨髁髕股關(guān)節(jié)面轉(zhuǎn)2孔直徑5mm的全層軟骨缺損，上孔用于自體對(duì)照，下孔用于自體軟骨細(xì)胞移植。異體對(duì)照組：轉(zhuǎn)孔方法同前，上孔僅行骨膜縫合覆蓋，下孔骨膜不縫合，不行細(xì)胞移植。 5．組織學(xué)評(píng)價(jià)：分別于術(shù)后4、8、12、16周施行空氣栓塞殺死各組家兔，切取股骨遠(yuǎn)端(包括缺損修復(fù)組織、鄰近軟骨和骨)。用于大體觀察，并對(duì)組織切片行Ⅱ型膠原免疫組化染色及HE染色。 結(jié)果： 1．利用

4、機(jī)械與酶消化法獲得的軟骨細(xì)胞，成功的進(jìn)行了體外單層及三維培養(yǎng)，構(gòu)建了穩(wěn)定的軟骨細(xì)胞體外三維培養(yǎng)體系。 2．成功的進(jìn)行了自體關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的建立及自體軟骨細(xì)胞移植加骨膜覆蓋技術(shù)。 3．體外三維培養(yǎng)條件下的自體關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨缺損模型的短期修復(fù)效果良好，組織學(xué)評(píng)價(jià)明顯優(yōu)于對(duì)照組。 結(jié)論： 1．利用體外三維培養(yǎng)的方法在短期內(nèi)能夠獲得較大數(shù)量表型穩(wěn)定的自體關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞。 2．自體軟骨細(xì)胞移植加蓋