細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)重組蛋白P29誘導(dǎo)綿羊的免疫保護(hù)力及其免疫機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)重組蛋白P29（rEg.P29）對(duì)綿羊免疫保護(hù)作用及其免疫機(jī)制的研究，為包蟲(chóng)病的免疫預(yù)防及疫苗的研制奠定理論基礎(chǔ)，并積累有用的資料。
　　方法：
　　利用基因工程重組技術(shù)制備的細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)重組蛋白P29免疫綿羊（免疫2次），并在第二次免疫后用制備好的的細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的蟲(chóng)卵感染動(dòng)物，通過(guò)與對(duì)照組的比較來(lái)觀察和計(jì)算重組蛋白是否能夠誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生對(duì)病原體的免疫保護(hù)力（檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)動(dòng)物肝臟包囊荷數(shù)，用減囊

2、率公式計(jì)算出重組蛋白所引起的免疫保護(hù)力）；同時(shí)，在重組蛋白免疫和蟲(chóng)卵感染動(dòng)物前后，分別采集各時(shí)間段的動(dòng)物血液、收集血清，用ELISA法檢測(cè)動(dòng)物血清的抗體（IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2）變化水平及細(xì)胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）的變化水平，以此來(lái)觀察重組蛋白免疫及蟲(chóng)卵感染動(dòng)物前后所引的體液免疫和細(xì)胞免疫變化水平。
　　結(jié)果：
　　1. rEg.P29免疫綿羊獲得了94.8％的免疫保護(hù)力。

3、r>　　2. rEg.P29在誘導(dǎo)綿羊產(chǎn)生免疫保護(hù)力的同時(shí)，引起動(dòng)物體液免疫指標(biāo)的變化：rEg.P29免疫動(dòng)物2周后，引起總IgG、IgG1、IgG2水平的增高，與免疫前和對(duì)照組的抗體水平相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。在蟲(chóng)卵感染后，免疫組IgG、IgG1、IgG2始終保持較高的水平，與對(duì)照組相比具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。IgM的水平在免疫組的早期即出現(xiàn)明顯的上升期，隨后下降，在蟲(chóng)卵感染后也出現(xiàn)了一個(gè)明顯的上升期。

4、IgA在實(shí)驗(yàn)組中免疫前、后相比，有一定的上升，上升的速度不及IgG、IgG1、IgG2，但上升水平與免疫前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），在蟲(chóng)卵感染后，與對(duì)照組相比較，IgA有了明顯的上升（P<0.01），并能持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間。rEg.P29免疫及蟲(chóng)卵感染動(dòng)物后IgG、IgG1、IgG2能長(zhǎng)期保持較高的水平，提示重組蛋白能通過(guò)誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生高水平的IgG來(lái)抵抗病原體的感染。IgM在重組蛋白免疫的早期及蟲(chóng)卵感染的早期出現(xiàn)一個(gè)明顯的升高，

5、隨后水平下降，說(shuō)明其具有早期體液免疫效應(yīng)。IgA在免疫后能夠出現(xiàn)增高，但不如IgG水平變化顯著，在蟲(chóng)卵感染后，其水平與對(duì)照組相比有了明顯的上升。
　　3. rEg.P29在誘導(dǎo)綿羊產(chǎn)生免疫保護(hù)力的同時(shí)，引起動(dòng)物發(fā)生細(xì)胞免疫指標(biāo)的變化：在免疫組中，感染前、后相比較，IFN-γ水平顯著升高（P<0.05），IL-2、IL-4、IL-10水平變化不顯著。免疫組與對(duì)照組相比，感染前、后的IFN-γ、IL-2水平均有顯著的升高（P<0.01

6、），IL-4只在感染前較對(duì)照組有升高（P<0.01），感染后與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，IL-10感染前、后差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而在對(duì)照組中，感染前、后相比，IL-4水平上升顯著（P<0.05），IFN-γ、IL-2及IL-10在感染前后的變化不明顯。由于IL-2、IFN-γ主要是由Th1型細(xì)胞所分泌，IL-4、IL-10主要是由Th2型細(xì)胞所分泌。rEg.P29免疫動(dòng)物組（免疫組）與對(duì)照相比，免疫組能夠明顯的引起IFN-γ和IL-2水平的

7、增高，且在蟲(chóng)卵感染后IFN-γ水平進(jìn)一步增高，提示rEg.P29能介導(dǎo)Th1型細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫應(yīng)答。對(duì)照組在動(dòng)物感染前后IFN-γ和IL-2和IL-10的變化不明顯，但I(xiàn)L-4在感染后水平有明顯的升高，提示未獲得免疫保護(hù)力的對(duì)照組可能介導(dǎo)的是以Th2型細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫應(yīng)答。
　　結(jié)論：
　　1. rEg.P29免疫綿羊獲得了94.8%的免疫保護(hù)力，是較好的抗包蟲(chóng)病的疫苗候選分子。
　　2. rEg.P29免疫綿羊后