旋毛蟲(chóng)Ts87重組蛋白黏膜免疫誘導(dǎo)的小鼠保護(hù)力的研究.pdf

1、黏膜免疫系統(tǒng)是由分布于呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道和乳腺黏膜內(nèi)的淋巴組織組成的，占據(jù)了機(jī)體淋巴組織的大部分。機(jī)體95﹪以上感染發(fā)生在黏膜部位，防治黏膜感染在人類(lèi)健康中占舉足輕重的地位，然而傳統(tǒng)的疫苗接種，如皮下注射等，不能有效誘導(dǎo)黏膜部位的免疫應(yīng)答，只有從黏膜部位接種疫苗才能誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答。近年來(lái)，隨著人們對(duì)黏膜免疫的重視以及相關(guān)理論和技術(shù)的不斷發(fā)展，黏膜疫苗的開(kāi)發(fā)成為了當(dāng)今免疫學(xué)的研究熱點(diǎn)，因?yàn)轲つひ呙绶显幻庖咴O(shè)計(jì)，即在感染的起始

2、階段起到預(yù)防目的旋毛蟲(chóng)的自然感染途徑是經(jīng)口感染，感染后旋毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)囊包在胃液及腸液作用下，幼蟲(chóng)自囊包逸出，并鉆入十二指腸及空腸上段的腸黏膜中進(jìn)行發(fā)育和繁殖，產(chǎn)于腸黏膜內(nèi)的新生幼蟲(chóng)侵入局部淋巴結(jié)或小靜脈，隨淋巴或血循環(huán)播散至全身致病。所以研究旋毛蟲(chóng)黏膜疫苗的關(guān)鍵是能在感染的起始部位腸道誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，來(lái)阻止病原體的入侵。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于旋毛蟲(chóng)黏膜疫苗的研究主要集中在使用全蟲(chóng)抗原作為免疫原，但這些抗原來(lái)源有限，且易引發(fā)非特異性反應(yīng)。重組抗原易于

3、制備，安全性好，迄今為止，有關(guān)重組抗原用于旋毛蟲(chóng)黏膜免疫的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究利用旋毛蟲(chóng)Ts87重組抗原經(jīng)黏膜途徑免疫小鼠，觀察其能否誘導(dǎo)腸道黏膜免疫應(yīng)答，即能否在感染的起始階段起到抗旋毛蟲(chóng)的作用，并初步探討其作用機(jī)制，以期制備抗旋毛蟲(chóng)病的黏膜疫苗。 選擇合適的佐劑和從哪個(gè)黏膜部位引入抗原是成功研制黏膜疫苗首先要解決的問(wèn)題。因此，本研究首先探討Ts87重組蛋白分別聯(lián)合不同佐劑(氫氧化鋁，Al(OH)3；霍亂毒素B亞單位，CT-

4、B； IMS1312；)經(jīng)口灌胃免疫小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用，觀察并比較其保護(hù)效果，從中選出一種較好的佐劑。150只NIH小鼠隨機(jī)分成分5組：CT-B+Ts87蛋白組、AI(OH)<,3>+Ts87蛋白組、IMSl312+Ts87蛋白組、單純Ts87蛋白組和對(duì)照組，灌胃免疫，間隔1周共免疫3次。末次免疫后第7d用400條旋毛蟲(chóng)感染期幼蟲(chóng)攻擊，比較各組小鼠腸道成蟲(chóng)數(shù)、雌蟲(chóng)生殖力和肌幼蟲(chóng)數(shù)，并收集腸黏液和血清，檢測(cè)特異性sIgA、IgG抗

5、體水平。 結(jié)果顯示：CT-B+Ts87蛋白組成蟲(chóng)減蟲(chóng)率、新生蚴減蟲(chóng)率和肌幼蟲(chóng)減蟲(chóng)率均比其它組高，腸黏液特異性sIgA和血清特異性IgG抗體水平也明顯高于其它組。這說(shuō)明CT-B不僅能誘導(dǎo)腸道黏膜免疫反應(yīng)，而且能誘導(dǎo)全身免疫反應(yīng)，并能有效促進(jìn)蟲(chóng)體排出，是輔助Ts87重組抗原發(fā)揮作用的良好黏膜佐劑。其次，比較Ts87重組抗原經(jīng)不同的黏膜免疫途徑接種產(chǎn)生的免疫保護(hù)效果。 本研究選擇了經(jīng)口和滴鼻兩種最常見(jiàn)的黏膜免疫途徑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以

6、確定哪一種途徑通過(guò)共同黏膜免疫系統(tǒng)(CMIS)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答更有效。CT-B聯(lián)合Ts87重組蛋白分別用灌胃和滴鼻兩種途徑免疫小鼠，比較各組小鼠腸道成蟲(chóng)數(shù)、雌蟲(chóng)生殖力和肌幼蟲(chóng)數(shù)；并比較各組小鼠鼻腔沖洗液、腸黏液、血清中特異性抗體水平(slgA、IgG、IgGl、IgG2a)。 結(jié)果顯示：兩種途徑都能誘導(dǎo)產(chǎn)生局部黏膜免疫反應(yīng)(slgA)和全身免疫反應(yīng)(IgG)，對(duì)腸道成蟲(chóng)排出，雌蟲(chóng)生殖力降低均有顯著作用，肌幼蟲(chóng)數(shù)也明顯減少。其中經(jīng)口

7、服途徑接種疫苗，在腸黏膜有很強(qiáng)的免疫反應(yīng)(產(chǎn)生slgA)出現(xiàn)，而鼻腔無(wú)明顯的免疫反應(yīng)；而滴鼻免疫后除了在鼻腔有免疫反應(yīng)(產(chǎn)生slgA)出現(xiàn)外，腸道也有明顯的免疫反應(yīng)，并且滴鼻免疫可以顯著降低免疫原的用量。這提示滴鼻免疫可能是一種更有效、更安全的免疫途徑。 為了進(jìn)一步探討免疫原誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)作用的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)選用CT-B聯(lián)合Ts87重組蛋白經(jīng)口接種，觀察小鼠腸黏膜形態(tài)變化、特異性sIgA抗體水平變化與蟲(chóng)體排出之間的相互關(guān)系。實(shí)驗(yàn)分4

8、組：免疫組(CT-B+Ts87)、佐劑組(CT-B)、蛋白組(Ts87)和對(duì)照組(生理鹽水)。各組小鼠于0、14、21d灌胃免疫。末次免疫后第7 d用400條旋毛蟲(chóng)感染期幼蟲(chóng)攻擊，在攻擊前和攻擊后第7、14、28、42 d，各取1 cm左右腸段固定、石蠟包埋、切片染色；并收集腸黏液和血清檢測(cè)特異性slgA、IgG、IgGl、IgG2a，抗體；同時(shí)比較各組小鼠腸道成蟲(chóng)數(shù)、雌蟲(chóng)生殖力和肌幼蟲(chóng)數(shù)。 結(jié)果顯示：小鼠經(jīng)口接種CT-B+Ts

9、87免疫原后，腸道黏膜及黏膜下層單核細(xì)胞和漿細(xì)胞明顯增多，腸道特異性sIgA水平顯著升高；攻擊感染后雖然小鼠腸黏膜充血，但上皮細(xì)胞基本完整，攻擊后第7 d腸道內(nèi)成蟲(chóng)數(shù)比對(duì)照組、佐劑組或蛋白組明顯減少，第14 d全部排出。對(duì)照組、佐劑組或蛋白組小鼠攻擊感染后，腸黏膜可見(jiàn)糜爛，上皮細(xì)胞有壞死脫落，小腸絨毛橫斷；腸道特異性sIgA水平?jīng)]有明顯升高；攻擊后第14 d腸道還有少量成蟲(chóng)未排出。這說(shuō)明腸道黏膜免疫應(yīng)答激活產(chǎn)生的特異性sIgA，對(duì)促進(jìn)排