細粒棘球絳蟲重組蛋白P29誘導綿羊的免疫保護力及其免疫機制研究.pdf

1、目的：
　　通過細粒棘球絳蟲重組蛋白P29（rEg.P29）對綿羊免疫保護作用及其免疫機制的研究，為包蟲病的免疫預防及疫苗的研制奠定理論基礎，并積累有用的資料。
　　方法：
　　利用基因工程重組技術制備的細粒棘球絳蟲重組蛋白P29免疫綿羊（免疫2次），并在第二次免疫后用制備好的的細粒棘球絳蟲的蟲卵感染動物，通過與對照組的比較來觀察和計算重組蛋白是否能夠誘導動物產(chǎn)生對病原體的免疫保護力（檢測并統(tǒng)計動物肝臟包囊荷數(shù)，用減囊

2、率公式計算出重組蛋白所引起的免疫保護力）；同時，在重組蛋白免疫和蟲卵感染動物前后，分別采集各時間段的動物血液、收集血清，用ELISA法檢測動物血清的抗體（IgG、IgA、IgM、IgG1、IgG2）變化水平及細胞因子（IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ）的變化水平，以此來觀察重組蛋白免疫及蟲卵感染動物前后所引的體液免疫和細胞免疫變化水平。
　　結果：
　　1. rEg.P29免疫綿羊獲得了94.8％的免疫保護力。

3、r>　　2. rEg.P29在誘導綿羊產(chǎn)生免疫保護力的同時，引起動物體液免疫指標的變化：rEg.P29免疫動物2周后，引起總IgG、IgG1、IgG2水平的增高，與免疫前和對照組的抗體水平相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。在蟲卵感染后，免疫組IgG、IgG1、IgG2始終保持較高的水平，與對照組相比具有明顯的統(tǒng)計學差異（P<0.01）。IgM的水平在免疫組的早期即出現(xiàn)明顯的上升期，隨后下降，在蟲卵感染后也出現(xiàn)了一個明顯的上升期。

4、IgA在實驗組中免疫前、后相比，有一定的上升，上升的速度不及IgG、IgG1、IgG2，但上升水平與免疫前比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），在蟲卵感染后，與對照組相比較，IgA有了明顯的上升（P<0.01），并能持續(xù)較長時間。rEg.P29免疫及蟲卵感染動物后IgG、IgG1、IgG2能長期保持較高的水平，提示重組蛋白能通過誘導動物產(chǎn)生高水平的IgG來抵抗病原體的感染。IgM在重組蛋白免疫的早期及蟲卵感染的早期出現(xiàn)一個明顯的升高，

5、隨后水平下降，說明其具有早期體液免疫效應。IgA在免疫后能夠出現(xiàn)增高，但不如IgG水平變化顯著，在蟲卵感染后，其水平與對照組相比有了明顯的上升。
　　3. rEg.P29在誘導綿羊產(chǎn)生免疫保護力的同時，引起動物發(fā)生細胞免疫指標的變化：在免疫組中，感染前、后相比較，IFN-γ水平顯著升高（P<0.05），IL-2、IL-4、IL-10水平變化不顯著。免疫組與對照組相比，感染前、后的IFN-γ、IL-2水平均有顯著的升高（P<0.01

6、），IL-4只在感染前較對照組有升高（P<0.01），感染后與對照組相比無明顯差異，IL-10感染前、后差異均無統(tǒng)計學意義。而在對照組中，感染前、后相比，IL-4水平上升顯著（P<0.05），IFN-γ、IL-2及IL-10在感染前后的變化不明顯。由于IL-2、IFN-γ主要是由Th1型細胞所分泌，IL-4、IL-10主要是由Th2型細胞所分泌。rEg.P29免疫動物組（免疫組）與對照相比，免疫組能夠明顯的引起IFN-γ和IL-2水平的

7、增高，且在蟲卵感染后IFN-γ水平進一步增高，提示rEg.P29能介導Th1型細胞為主的細胞免疫應答。對照組在動物感染前后IFN-γ和IL-2和IL-10的變化不明顯，但IL-4在感染后水平有明顯的升高，提示未獲得免疫保護力的對照組可能介導的是以Th2型細胞為主的細胞免疫應答。
　　結論：
　　1. rEg.P29免疫綿羊獲得了94.8%的免疫保護力，是較好的抗包蟲病的疫苗候選分子。
　　2. rEg.P29免疫綿羊后