構(gòu)建全生物化組織工程血管的種子細胞及血管基質(zhì)的實驗研究.pdf

1、人們長期以來為了尋求一種最佳的血管替代物，嘗試了自體動靜脈、人工材料、生物材料等多種方法，但這些方法均存在一些不足。組織工程概念的提出及技術(shù)的逐步成熟使在體外培植具有生物活性，結(jié)構(gòu)、功能與自體血管相類似的人工血管成為可能。本實驗培養(yǎng)內(nèi)皮祖細胞和豬主動脈平滑肌細胞為種子細胞，脫除豬主動脈血管壁細胞獲得脫細胞血管基質(zhì)，為下一步構(gòu)建組織工程血管提供細胞和支架材料。 目的：1.獲取內(nèi)皮祖細胞和平滑肌細胞，為構(gòu)建組織工程血管提供種子細胞；

2、 2.制備脫細胞血管基質(zhì)，為構(gòu)建組織工程血管提供支架材料。 方法：1.無菌條件下采集豬外周血，肝素抗凝，經(jīng)淋巴細胞分離液(相對密度為1.077g/ml)，密度梯度離心分離外周單個核細胞，貼壁培養(yǎng)，獲得內(nèi)皮祖細胞(EPCs)并傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下(IM)形態(tài)學觀察及免疫組織化學(IHC)鑒定；無菌條件下取豬胸主動脈，采用改良組織塊法分離培養(yǎng)豬主動脈平滑肌細胞，進行形態(tài)學觀察及免疫組織化學(IHC)鑒定。 2.采用

3、胰蛋白酶、低滲溶液、化學除垢劑法處理豬胸主動脈來獲得脫細胞血管基質(zhì)，并對萁進行組織學觀察和生物學性能測試及保存實驗。 結(jié)果：1.成功的培養(yǎng)出內(nèi)皮祖細胞并傳代。剛分離出的單個核細胞小且圓，瑞氏染色呈藍紫色，至生長6天時呈現(xiàn)內(nèi)皮樣改變，倒置顯微鏡下內(nèi)皮細胞呈“鵝卵石”形態(tài)，CD31，CD34，F(xiàn)lk-1和vWF免疫熒光染色為陽性，以及FITC-ulex-lectin和Dil- acLDL免疫熒光均陽性；成功分離培養(yǎng)出平滑肌細胞，呈典

4、型的“峰一谷”狀，平滑肌細胞肌動蛋白抗體(+)。 2.成功獲得脫細胞血管基質(zhì)，H-E染色和掃描電鏡觀察可見脫細胞組織基質(zhì)中細胞已全部脫除，膠原纖維和彈性纖維保持原來的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，呈條索狀排列，細胞已全部去除，基底面完整，透射電鏡下可見膠原纖維橫紋；其膠原蛋白含量和力學性狀與新鮮組織無明顯差別。 結(jié)論：1.所培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞可為組織工程血管的研究提供細胞來源； 2.所制備的脫細胞血管基質(zhì)可為組織工程血管的