中國漢族人群P2X7R基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關聯(lián)研究.pdf

1、研究背景：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種典型的自身免疫性疾病,以大量自身抗體產(chǎn)生、補體激活和免疫復合物沉積為主要特征,導致組織和器官損傷。雖然針對SLE的病因和發(fā)病機制,已經(jīng)提出過很多學說,包括自身免疫學說、遺傳學說、遺傳和環(huán)境交互作用學說等,但到目前為止,仍然不清楚SLE發(fā)病的確切原因。只有深入研究其發(fā)病機制,才能有望尋找到更有效的治療策略。
　　P2X嘌呤受

2、體7是一種蛋白,由P2RX7基因編碼。P2X7R屬于由細胞外ATP門控的離子通道家族,但是跟其他P2X受體不同,它很大程度受造血細胞的限制。P2X7R在很多免疫功能中起作用,包括細胞因子的分泌以及淋巴細胞導航受體CD62L的脫落。因為P2X7R缺失鼠表現(xiàn)出抗體誘導型關節(jié)炎抵抗以及受損的CD62L脫落和IL-1β分泌,刺激這個受體會促進炎癥反應意味著P2X7R在自身免疫病中有潛在的作用。刺激促炎癥反應的脂多糖P2X7R可導致IL-1β分泌

3、,細胞凋亡發(fā)生率的升高和CD62L脫落。而且,編碼人類P2X7R的基因位于12q24區(qū)域,這個區(qū)域在西班牙和歐洲美國人家族中被證實是狼瘡易感位點,叫作SLEB4。
　　以上這些證據(jù)均顯示,P2X7R可能在SLE的發(fā)病中起著重要作用。然而目前關于P2X7R在SLE發(fā)病機理中的研究還很有限,本課題組根據(jù)最新的研究進展,提出假設:P2X7R基因可能與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的遺傳易感性有關,而且P2X7R基因多態(tài)性很可能與狼瘡腎炎、不同的臨床和實

4、驗室特征有關。深入研究P2X7R在SLE發(fā)病中的作用,將有望找到新的治療靶點。
　　目的：
　　旨在通過較大規(guī)模的系統(tǒng)性紅斑狼瘡遺傳流行病學調(diào)查,明確P2X7R基因單核苷酸多態(tài)性及單倍型與SLE的遺傳關聯(lián)性,結(jié)合臨床資料探討P2X7R基因單核苷酸多態(tài)性與SLE表型之間的關聯(lián)性,以及P2X7R基因多態(tài)性與P2X7R表達之間的關系。
　　方法：
　　病例來自于安徽醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院風濕免疫科和安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)

5、院風濕免疫科的SLE患者。SLE的診斷依據(jù)1997年美國風濕病學會修訂的SLE分類標準。正常對照為:不符合SLE診斷標準;無重大疾病史;本人或直系親屬無自身免疫性疾病。
　　收集684例SLE患者、410例正常對照檢測P2X7R基因多態(tài)性。問卷調(diào)查收集一般情況和臨床資料,并進行SLE疾病活動指數(shù)(SLE disease activity index,SLEDAI)評分。獲得研究對象知情同意后,抽取外周靜脈血和進行問卷調(diào)查。

6、　　選取SLE患者16例和健康志愿者14例,用流式細胞術(shù)檢測外周血PBMC中淋巴細胞中P2X7R+細胞百分比,淋巴細胞中CD19+P2X7R+細胞百分比,CD4+P2X7R+細胞百分比,分析其變化與P2X7R基因多態(tài)性之間的關系。
　　利用ABI7300系統(tǒng)進行SNP基因分型分析驗證P2X7R基因多態(tài)性與SLE的關系,并用Plink1.03軟件進行統(tǒng)計分析。
　　用EpiData3.02軟件建立數(shù)據(jù)庫。
　　采用SPS

7、S13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1. P2X7R基因SNPs多態(tài)性與SLE遺傳易感性關系:
　　位點rs1718119的A/A、A/G、G/G基因型頻率在病例組和對照組中分別為0.670％、18.928%、80.402%和3.430%、27.704%、68.865%, A和G等位基因的頻率在兩組中分別為10.134%、89.866%和17.282%、82.718%,兩組間差異有統(tǒng)計學意義。經(jīng)χ2檢驗,

8、無論在病例組還是對照組,位點rs1718119的基因型頻率均符合HWE定律(χ2=0.917,P=0.338;χ2=0.364,P=0.546)。等位基因G為系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病的危險等位基因,等位基因G攜帶者是等位基因A攜帶者系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病危險的1.853倍,GG基因型攜帶者是AA基因型攜帶者系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病危險的5.977倍,遺傳模型為累加模型。
　　位點rs3751143的A/A、A/C、C/C基因型頻率在病例組和對照組

9、中分別為59.900%、35.940%、4.160%和60.302%、34.673%、5.025%,基因型和SLE易感性之間未顯示關聯(lián);A和 C等位基因的頻率在兩組中分別為77.870%、22.130%和77.638%、22.362%,兩組間差異無統(tǒng)計學意義,經(jīng)χ2檢驗,無論在病例組還是對照組,位點rs3751143的基因型頻率均符合HWE定律(χ2=1.101,P=0.294;χ2=0.001,P=0.977)。
　　位點rs2

10、230911的C/C、C/G、G/G基因型頻率在病例組和對照組中分別為67.613%、29.382%、3.0005%和68.766%、28.463%、2.771%,基因型和SLE易感性之間未顯示關聯(lián);C和G等位基因的頻率在兩組中分別為82.304%、17.696%和82.997%、17.003%,兩組間差異無統(tǒng)計學意義,經(jīng)χ2檢驗,無論在病例組還是對照組,位點rs2230911的基因型頻率均符合HWE定律(χ2=0.045,P=0.83

11、2;χ2=0.029 P=0.865)。
　　應用SHEsis軟件構(gòu)建P2X7R基因常見單倍型,結(jié)果顯示,在中國漢族人群,存在以下7種單倍型結(jié)構(gòu)AAC、AAG、ACC、GAC、GAG、GCC、GCG,AAC單倍型在SLE病例組和對照組間頻率差異有統(tǒng)計學意義。rs1718119,rs3751143, rs2230911三個位點連鎖不平衡分析,3個SNPs均存在連鎖不平衡。
　　2.P2X7R基因SNPs多態(tài)性與LN關系:位點r

12、s1718119的G/G、A/G、A/A基因型頻率在LN組和非LN的SLE患者組中分別為77.368%、21.579%、1.053%和81.818%、17.690%、0.491%,基因型和LN易感性之間未顯示關聯(lián);G和A等位基因的頻率在兩組中分別為88.158%、11.842%和90.663%、9.337%,兩組間差異無統(tǒng)計學意義;
　　位點rs3751143的A/A、A/C、C/C基因型頻率在LN組和非LN的SLE患者組中分別為

13、61.053%、34.737%、4.211%和59.367%、36.496%、4.136%,基因型和LN易感性之間未顯示關聯(lián);C和A等位基因的頻率在兩組中分別為22.384%、77.616%和21.579%、78.421%,兩組間差異無統(tǒng)計學意義;
　　位點rs2230911的C/C、C/G、G/G基因型頻率在LN組和非LN的SLE患者組中分別為73.016%、25.397%、1.587%和65.122%、31.220%、3.65

14、9%;C和G等位基因的頻率在兩組中分別為85.714%、14.286%和80.732%、19.268%,兩組間差異有統(tǒng)計學意義,等位基因C攜帶者是等位基因G攜帶者LN發(fā)病危險的1.432倍OR=1.432(1.023-2.005)。
　　3.P2X7R基因SNPs多態(tài)性與SLE表型關系:
　　采用病例-病例分析檢測SNPs多態(tài)性與SLE首發(fā)癥狀的潛在易感性關聯(lián), rs1718119與首發(fā)口腔潰瘍(χ2=9.894, P=0.

15、006)有統(tǒng)計學關聯(lián);rs2230911與首發(fā)口腔潰瘍(χ2=12.780,P=0.002),與首發(fā)胸膜炎(χ2=7.311, P=0.028)有統(tǒng)計學關聯(lián),其他均無統(tǒng)計學關聯(lián)。
　　采用病例-病例分析檢測SNPs多態(tài)性與SLE主要臨床特征的潛在易感性關聯(lián),rs1718119與口腔潰瘍(χ2=9.455, P=0.007)有統(tǒng)計學關聯(lián);rs2230911與口腔潰瘍(χ2=10.329,P=0.006),與神經(jīng)系統(tǒng)損傷(χ2=6.2

16、35,P=0.049)有關聯(lián),其他均無統(tǒng)計學關聯(lián)。
　　采用病例-病例分析檢測SNPs多態(tài)性與SLE主要臨床表型及實驗室特征的潛在易感性關聯(lián), rs3751143與視神經(jīng)損傷(χ2=5.541,P=0.019),有統(tǒng)計學關聯(lián);rs2230911與血小板降低(χ2=5.909,P=0.015),與白細胞降低(χ2=7.642,P=0.006)有統(tǒng)計學關聯(lián),其他均無統(tǒng)計學關聯(lián)。
　　4.P2X7R基因SNPs多態(tài)性與P2X7R表

17、達的關系:
　　位點rs1718119由于外周血淋巴細胞中P2X7R表達水平在本資料的基因型AA中的無分布,所以只比較在基因型GG與 GA之間的差別,結(jié)果顯示淋巴細胞中P2X7R+細胞百分比在GG與GA之間的差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。SLE患者P2X7R基因位點rs3751143與外周血淋巴細胞中P2X7R表達水平的關系,在本資料基因型CC中無分布,所以只比較在基因型AA與AC之間的差異如,均無統(tǒng)計學意義。SLE患者P2X

18、7R基因位點rs2230911與外周血淋巴細胞中P2X7R表達水平的關系,在本資料基因型GG中無分布,所以只比較在基因型CC與CG之間的差異,,均無統(tǒng)計學意義。相同基因型病例對照P2X7R表達水平比較,差異均無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　(1)P2X7R基因(rs1718119)多態(tài)性在中國漢族人群中與SLE的遺傳易感性有關;構(gòu)建的AAC單倍型與SLE有關聯(lián);rs1718119、rs3751143和rs2230911存在連