Raf激酶抑制蛋白調控ERK信號通路在糖尿病腎臟疾病發(fā)病中的作用及藥物干預研究.pdf

1、目的：1.通過檢測糖尿病腎病大鼠模型腎組織 RKIP、P-ERK1/2表達狀況來探討RKIP調控ERK信號通路在糖尿病腎病發(fā)病中的作用。2.研究利妥昔單抗對糖尿病腎病大鼠腎組織RKIP、P-ERK1/2表達的影響，探討其治療糖尿病腎病可能的新機制。
　　方法：60只SD大鼠隨機取20只作為正常對照組（N組），剩余40只大鼠予高糖高脂飲食，間斷CFA（完全弗氏佐劑）聯(lián)合 STZ（鏈脲佐菌素）造糖尿病模型，以連續(xù)2次隨機血糖＞16.6

2、5mmol/L為糖尿病模型成立。造模后14周24小時尿蛋白＞30mg為糖尿病腎病成模標準。將糖尿病腎病模型SD大鼠隨機分2組，糖尿病腎病組（M組），利妥昔單抗治療組（D組）。將D組按不同觀察時間(2w、4w)用利妥昔單抗58mg／kg/w的藥量進行尾靜脈推注（模擬靜脈點滴速度）。同時，N組與M組給予等量生理鹽水做對照。分別于模型成功及利妥昔藥物治療后第2w、4w周留取大鼠尿和腎組織標本，比較N組、M組、D組、大鼠腎小球結構和功能的改變，

3、HE、PAS染色觀察腎組織病理改變，免疫組化方法檢測各組腎組織RKIP、P-ERK1/2表達，Western blotting檢測各組RKIP的表達。
　　結果：
　　(1)造模后5只大鼠未成模，成模率87.5％，成模后大鼠因血糖控制不佳死亡3只，病死率5％。
　　(2)M組及D組大鼠大鼠隨著病程的延長，血糖顯著升高，出現(xiàn)蛋白尿，腎重增加，與對照組相比有顯著性差異(P<0.05)。D組大鼠尿蛋白輕度減少，但與M組差別無

4、顯著性（P＞0.05）。
　　(3)病理組織學觀察M組出現(xiàn)腎小球基底膜增厚、系膜細胞增生、細胞外基質沉積、單核巨噬細胞浸潤、腎小管上皮細胞變性或脫落等變化；D組（利妥昔單抗組）較M組腎小球基底膜增厚輕度減輕，系膜細胞增生及細胞外基質沉積、單核巨噬細胞浸潤減少。
　　(4)與對照組比較，M組、D組大鼠腎組織內P-ERK1/2明顯增高，RKIP降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);經利妥昔單抗治療后，D組與M組同期相比P-ER

5、K1/2表達減少、RKIP表達增多,但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：1、糖尿病大鼠腎臟疾病形成過程中，腎臟組織磷酸化ERK1/2表達明顯增加，存在Raf-I／MEK／ERKl，2信號轉導通路的活化,RKIP表達水平下降，糖尿病腎臟疾病發(fā)展過程中腎臟組織Raf-I／MEK／ERKl，2信號轉導通路的的激活與RKIP表達下降有關。
　　2、給予利妥昔單抗治療后對糖尿病腎病大鼠的血糖、尿蛋白及腎組織RKIP、P-E