奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌相關(guān)毒力因子的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)對(duì)奶牛乳腺炎陽性和陰性乳汁進(jìn)行細(xì)菌分離，用金黃色葡萄球菌的特異性檢測(cè)引物檢測(cè)出金黃色葡萄球菌。 金黃色葡萄球菌溶血素是一種外毒素，是其主要毒力因子之一，包括α、β、γ和δ毒素。溶血素對(duì)多種哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞有溶血作用，并可作用于平滑肌細(xì)胞，引起乳腺平滑肌收縮、麻痹，引發(fā)牛的壞疽性乳腺炎。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)雙重PCR方法，檢測(cè)山東省內(nèi)20多個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)乳腺炎病例中分離得到的金黃色葡萄球菌，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：80％以上的金葡菌存在α溶血素基因，

2、基因片斷長(zhǎng)704bp;而β溶血素基因比例為59％，片斷大小為496bp。 檢測(cè)金黃色葡萄球菌粘附素基因Fnbp A和Fnbp B，分析奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌臨床分離株纖連蛋白連接蛋白主效基因。利用設(shè)計(jì)合成的特異性引物對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室所分離鑒定的金葡菌臨床分離株進(jìn)行雙重PCR檢測(cè)。PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳成像顯示，分別在524bp和642bp處出現(xiàn)特異性條帶。通過對(duì)金葡菌臨床分離株雙重PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：95％以

3、上的金葡菌存在粘附素基因Fnbp A，而Fnbp B基因僅有10％。 血漿凝固酶是檢驗(yàn)致病性金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)，它們能使含有抗凝劑的家兔或人的血漿凝固，有助于致病菌抵御宿主體內(nèi)吞噬細(xì)胞和殺菌物質(zhì)的作用。依據(jù)金黃色葡萄球菌血漿凝固酶基因序列，設(shè)計(jì)合成特異性引物，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增其基因，并將擴(kuò)增基因克隆入T載體，進(jìn)行序列測(cè)定，對(duì)所分離的奶牛乳腺炎病原菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示：金黃色葡萄球菌擴(kuò)增出特異性條帶，大小為761bp；

4、其他菌株未出現(xiàn)條帶。 金黃色葡萄球菌Fnbp的抗體不僅可以阻止細(xì)菌的黏附，而且還是一種調(diào)理素，可以促進(jìn)機(jī)體對(duì)細(xì)菌的清除作用。金黃色葡萄球菌的α-溶血素是一種胞外毒素，其類毒素對(duì)金黃色葡萄球菌所致的羊乳腺炎有部分保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)利用獲得的基因工程蛋白rFnbp、rα-HL及真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1+-ClfA，混合佐劑免疫實(shí)驗(yàn)小鼠，通過ELISA方法檢測(cè)血清中的抗體水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：所有蛋白疫苗免疫實(shí)驗(yàn)小白鼠在首免后所采集的血清