H2O2促發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：氧化應(yīng)激可直接導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡，又通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡[1]。又有研究顯示：心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中都存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmicreticulum stress，ERS）的調(diào)控機(jī)制。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡是否與ERS的調(diào)控機(jī)制有關(guān)，有待進(jìn)一步研究，故探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：給予乳鼠心肌細(xì)胞高低兩種濃度和不同時(shí)間過氧化氫（H2O2）刺激，實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組，低濃度組（100 μM H2

2、O2）和高濃度組（500 μM H2O2）。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組心肌細(xì)胞的凋亡率，通過凋亡率的比較得出最佳作用濃度和時(shí)間點(diǎn)；采用蘇木精-伊紅染色法（HE）觀察心肌細(xì)胞凋亡的典型形態(tài)；通過Hoechest 染色觀察心肌細(xì)胞凋亡的細(xì)胞核變化；通過Western Blotting 檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白p-PERK和CHOP的表達(dá)變化。進(jìn)一步采用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑化學(xué)伴侶PBA（4-phenylbutyricacid）抑制心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，

3、通過Western Blotting 檢測(cè)p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表達(dá)變化；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Caspase-12和Caspase-3的活性。
　　 結(jié)果：（1）H2O2（100μM）刺激心肌細(xì)胞8h 時(shí)心肌細(xì)胞凋亡率為最高。（2）心肌細(xì)胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)：細(xì)胞質(zhì)膜保持完整，但核發(fā)生固縮，邊緣化等改變。（3）心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白p-PERK和CHOP表達(dá)顯著增高；H2O2 處理心肌細(xì)胞8h組p-P

4、ERK和CHOP 蛋白表達(dá)為最高。（4）加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑PBA預(yù)處理心肌細(xì)胞后可有效抑制心肌細(xì)胞凋亡；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白p-PERK、CHOP和p的表達(dá)與H2O2 處理組相比亦顯著下降（P＜0.01）；Caspase-3和Caspase-12的活性與H2O2 處理組相比亦顯著下調(diào)（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：低濃度H2O2（100μM）可顯著誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，高濃度H2O2（500μM）則導(dǎo)致心肌細(xì)胞發(fā)生壞死；低濃度H2