黃芩苷對TCR Vβ、CD79、IL-1RⅠ mRNA表達的影響.pdf

1、目的：研究黃芩苷對人外周血T細胞TCRVβmRNA、B細胞CD79amRNA、單核細胞IL-1RImRNA表達的影響以及TCRαβ、BCRmIgM、IL-1RI是否是黃芩苷作用受體。 方法：1、分離細胞：采用Ficoll分離液法分離人外周血單個核細胞，再以貼壁黏附法分離單核細胞和淋巴細胞，最后將收集得到的淋巴細胞用尼龍毛柱法分離出T、B淋巴細胞。2、將收集的T、B淋巴細胞及單核細胞分組培養(yǎng)：T、B細胞各分四個處理組，分別是空白對

2、照組（T1、B1）、黃芩苷組（T2、B2）、抗體封閉用藥組（T3、B3）和抗體封閉對照組（T4、B4），其中T細胞用抗TCRαβ單克隆抗體封閉TCR，B細胞用抗BCRmIgMF（ab’）2封閉mIgM。單核細胞分三個處理組，分別是空白對照組（M1）、黃芩苷組（M2）、IL-1ra（IL-1受體拮抗劑）競爭抑制組（M3）。各組細胞同時置37℃5％CO2箱培養(yǎng)48h。3、逆轉(zhuǎn)錄反應：利用Trizol法分別提取各組細胞的總RNA，以總RNA為

3、模板逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，-70℃保存。4、熒光定量PCR：以Genebank中的人源性TCRVβ、CD79a、CD79b、IL-1RImRNA序列為目標基因，利用PrimerPremier5.0軟件設計引物。以cDNA為模板，結(jié)合溫度梯度曲線分析和產(chǎn)物熔解曲線分析尋找各待檢指標的最佳退火溫度，依據(jù)其結(jié)果制定不同的擴增程序，利用SYBRGreenI定量PCR（qPCR）分別檢測各T細胞組TCRVβmRNA、各B細胞組CD79mRNA

4、以及各單核細胞組IL-1RImRNA的表達。 結(jié)果：1、T細胞組：T2組較T1組TCRVβmRNA相對表達明顯增加（p<0.01），T3組較T2組TCRVβmRNA相對表達明顯降低（p<0.01），且T3組較T4、T1組TCRVβmRNA相對表達輕度增高，但無顯著性差異（P>0.05）。2、B細胞組：B2組較Bl組CD79a、CD79bmRNA相對表達均明顯增強（p<0.01），B3組較B2組CD79a、CD79bmRNA相對表

5、達均明顯抑制（P<0.01），且B3組較B4、B1組CD79a、CD79bmRNA相對表達均輕度增高，但無顯著性差異（P>0.05）。3、單核細胞組：M2組較M1組IL-1RImRNA相對表達明顯增加（p<0.01），M3組較M2組IL-1RImRNA相對表達明顯抑制（P<0.01），且M3組較M1組IL-1RImRNA相對表達輕度增高，但無顯著性差異（P>0.05）。 結(jié)論：1、T細胞組：黃芩苷能顯著增加T細胞TCRVβmRN