黃芩苷抗RSV作用及對NF-κB信號通路和IL-8、FKN表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 1.通過觀察呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染人肺癌腺上皮細(xì)胞(A549細(xì)胞)6h、12h、24h、48h時的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)及核因子-κB(NF-κB)信號通路中NF-κB復(fù)合物抑制因子(IκB)-α、NF-κB p65亞基及趨化因子白細(xì)胞介素(IL)-8、fractalkine(FKN)基因的表達(dá)，探討RSV感染對A549細(xì)胞的作用及NF-κB信號通路的激活和趨

2、化因子表達(dá)的影響；2.通過觀察中藥單體黃芩苷(baicalin)治療后RSV感染A549細(xì)胞CPE的變化和細(xì)胞存活率及IκB-α、NF-κB p65和IL-8、FKN表達(dá)的影響，探討黃芩苷的治療作用及抗炎機(jī)制，為抗RSV感染藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)和新的途徑。 方法： 1.將A549細(xì)胞分成5個實(shí)驗(yàn)組：(1)病毒組(C組)：接種RSV半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID50)(TCID50=10-7.7/50ul)，35℃、5％C

3、O2箱內(nèi)吸附2h，棄接種的病毒液，換成細(xì)胞維持液。(2)治療組：設(shè)黃芩苷治療組(D組)和地塞米松(dexamethasone，DXM)治療組(E組)，接種RSV病毒100TCID50，35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h，棄接種的病毒液，DXM治療組換成用細(xì)胞維持液稀釋的DXM(終濃度為0.156mg/ml)，黃芩苷治療組換成用細(xì)胞維持液稀釋的黃芩苷(終濃度為0.156mg/ml)。(3)對照組：設(shè)細(xì)胞對照組(A組)和藥物對照組(B組)，細(xì)胞

4、對照組接種對照液，35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h，換成細(xì)胞維持液；藥物對照組接種對照液，35℃、5％CO2箱內(nèi)吸附2h，換成用細(xì)胞維持液稀釋的黃芩苷(終濃度為0.156 mg/ml)。各組依據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，繼續(xù)在上述條件下培養(yǎng)，于RSV感染后/藥物治療后的不同時間點(diǎn)(6h、12h、24h、48h)，收集細(xì)胞。 2.應(yīng)用微量細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)觀察RSV感染人喉癌(Hep-2)細(xì)胞、A549細(xì)胞的CPE；觀察不同濃度黃芩苷和DXM對A549細(xì)

5、胞的CPE及RSV感染后CPE的抑制作用；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法進(jìn)行藥物對細(xì)胞的毒性測定(即藥物的無毒限量測定)和藥物的抗RSV作用(計(jì)算細(xì)胞存活率)測定，從而得出實(shí)驗(yàn)用藥的最佳作用濃度。 3.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測IκBα、IL-8及FKN mRNA表達(dá)情況；免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)法檢測IκBα、NF-κB p65蛋白水平。 結(jié)論： 1.黃芩苷具有體外抗SV作用。 2.A5