乳酸菌素Lacticin518發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、乳酸菌素是一類安全無(wú)毒的生物防腐劑，在食品、飼料和醫(yī)藥等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。乳酸菌細(xì)菌素的積累不僅受到菌株本身遺傳特性的影響，還受到發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分的影響，因而為了提高細(xì)菌素的產(chǎn)量，本研究利用生物學(xué)軟件進(jìn)行了乳酸菌產(chǎn)生細(xì)菌素的條件摸索。
　　 建立了利用酶標(biāo)儀快速測(cè)定乳酸菌素lacticin518效價(jià)的方法。研究表明，以Nisin為參照，在指示菌接種量為10％、培養(yǎng)時(shí)間為8h的條件下，Nisin效價(jià)和指示菌吸光值的對(duì)數(shù)

2、值之間有著很好的線性關(guān)系。在用于乳酸菌素lacticin518效價(jià)檢測(cè)時(shí)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5％，該方法比傳統(tǒng)的瓊脂擴(kuò)散法所需要的檢測(cè)時(shí)間要短，適合本實(shí)驗(yàn)乳酸菌素lacticin518效價(jià)的研究。
　　 研究了種齡、接種量、培養(yǎng)方式、發(fā)酵液的初始pH以及發(fā)酵溫度對(duì)乳酸菌素lacticin518效價(jià)的影響。研究表明，種齡為12h的種子液、4％的接種量、靜置培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH為7.5、28℃是乳酸菌素lacticin518合成的

3、最優(yōu)環(huán)境因素，其中以發(fā)酵初始pH和發(fā)酵溫度的影響最大。
　　 在培養(yǎng)基成分單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面法對(duì)培養(yǎng)基各組成成分的濃度進(jìn)行了優(yōu)化。單因素實(shí)驗(yàn)表明乳酸菌素lacticin518合成的最佳碳、氮源分別為蔗糖和胰蛋白胨，吐溫80是乳酸菌素lacticin518產(chǎn)生最適合的刺激因子。通過(guò)Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)，探明了胰蛋白胨、磷酸二氫鉀和硫酸鎂是對(duì)乳酸菌素lacticin518的合成影響最大的培養(yǎng)基成分。通過(guò)快速

4、上升實(shí)驗(yàn)和中心復(fù)合實(shí)驗(yàn)，確定了最適培養(yǎng)基（g/L）為：蔗糖20，酵母粉5.0，胰蛋白胨8.18，牛肉膏10，硫酸鎂0.82，磷酸氫二鉀2.8，檸檬酸銨5.0，乙酸鈉5.0，硫酸錳0.25，吐溫805ml。
　　 研究了乳酸菌Lactc518的生長(zhǎng)、乳酸菌素lacticin518的產(chǎn)生以及發(fā)酵產(chǎn)酸三者之間的耦聯(lián)性。在最適的發(fā)酵條件和最適培養(yǎng)基成分條件下，乳酸菌Lactc518的生長(zhǎng)延滯期為2h，然后迅速的進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在12h時(shí)

5、菌株的生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期。乳酸菌素lacticin518在4h開(kāi)始，在14h乳酸菌素lacticin518的效價(jià)達(dá)到頂峰，此時(shí)乳酸菌素lacticin518效價(jià)為180.13U/ml，較之最初始條件下乳酸菌素lacticin518效價(jià)96.72 U/ml，效價(jià)增加了86.3％。乳酸菌Lactc518在延滯期略微產(chǎn)酸，然后進(jìn)入酸的高產(chǎn)期，10h后產(chǎn)酸能力逐漸減弱。乳酸菌Lactc518的生長(zhǎng)、lacticin518的產(chǎn)生及發(fā)酵產(chǎn)酸三者之間為部