乳酸片球菌素發(fā)酵條件的優(yōu)化及分離純化的研究.pdf

1、細(xì)菌素是微生物的代謝產(chǎn)物，有的細(xì)菌素已作為食品防腐劑用于提高食品的安全性。本研究的目的是以從國內(nèi)發(fā)酵食品中分離出的乳酸片球菌PA003(Pediococcus acidilactici PA003)為研究對(duì)象，探索提高其片球菌素產(chǎn)率的培養(yǎng)條件，研究片球菌素的分離純化技術(shù)。
　　 乳酸片球菌產(chǎn)生的片球菌素對(duì)產(chǎn)生菌有吸附作用，Yang等利用該吸附特性建立了分離純化片球菌素的方法。本試驗(yàn)對(duì)乳酸片球菌PA003產(chǎn)生的片球菌素的吸附作用進(jìn)

2、行了研究，表明片球菌素對(duì)產(chǎn)生菌的吸附具有pH依賴性，在pH為6時(shí)，片球菌素對(duì)產(chǎn)生菌菌體的吸附程度最大，達(dá)60％，在pH3以下和pH10以上，對(duì)菌體的吸附程度為零。根據(jù)上述現(xiàn)象，建立了在pH6吸附，pH10解吸附的方法，蛋白濃度提高了2.53倍，比活為2.33×105AU/mg。
　　 在搖瓶培養(yǎng)條件下，對(duì)培養(yǎng)基組分，包括碳源、氮源、表面活性劑等對(duì)乳酸片球菌素產(chǎn)量的影響進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)最適的培養(yǎng)基組成為葡萄糖2.5％、大豆蛋白胨1

3、.5％、蛋白胨1.5％、牛肉膏2％，吐溫801％，磷酸氫二鉀0.2％，乙酸鈉0.5％，檸檬酸銨0.2％，硫酸鎂0.058％，硫酸錳0.025％。采用此培養(yǎng)基，在37℃條件下培養(yǎng)16小時(shí)，片球菌素的效價(jià)可達(dá)到6260.245AU/mL，比常規(guī)MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)效價(jià)提高了約9倍。
　　 用常規(guī)MRS培養(yǎng)基，接種乳酸片球菌，37℃條件下培養(yǎng)16小時(shí)后，獲取片球菌素解吸附的菌體細(xì)胞，細(xì)胞經(jīng)破碎處理后，測(cè)定其片球菌素效價(jià)大小，發(fā)現(xiàn)胞內(nèi)片球菌

4、素效價(jià)可達(dá)到胞外片球菌素效價(jià)的30％。
　　 將乳酸片球菌接種至MRS培養(yǎng)基，于5升發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)。發(fā)酵條件為溫度37℃，轉(zhuǎn)速200 rpm，pH值6.0、6.5、7.0和8.0，發(fā)現(xiàn)最適產(chǎn)片球菌素pH是6.5，最適于菌體生長(zhǎng)的pH是7.0，而在pH8.0時(shí)片球菌已無生長(zhǎng)。通過在菌體生長(zhǎng)穩(wěn)定期流加限制性底物葡萄糖，發(fā)現(xiàn)流加低濃度的葡萄糖(3g/h)更適于片球菌素的產(chǎn)生。最高效價(jià)是1147.821AU/mL，是未流加葡萄糖情況下