乳酸菌素Lacticin518發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、乳酸菌素是一類安全無毒的生物防腐劑，在食品、飼料和醫(yī)藥等領域中具有廣泛的應用價值。乳酸菌細菌素的積累不僅受到菌株本身遺傳特性的影響，還受到發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分的影響，因而為了提高細菌素的產量，本研究利用生物學軟件進行了乳酸菌產生細菌素的條件摸索。
　　 建立了利用酶標儀快速測定乳酸菌素lacticin518效價的方法。研究表明，以Nisin為參照，在指示菌接種量為10％、培養(yǎng)時間為8h的條件下，Nisin效價和指示菌吸光值的對數

2、值之間有著很好的線性關系。在用于乳酸菌素lacticin518效價檢測時，相對標準偏差小于5％，該方法比傳統(tǒng)的瓊脂擴散法所需要的檢測時間要短，適合本實驗乳酸菌素lacticin518效價的研究。
　　 研究了種齡、接種量、培養(yǎng)方式、發(fā)酵液的初始pH以及發(fā)酵溫度對乳酸菌素lacticin518效價的影響。研究表明，種齡為12h的種子液、4％的接種量、靜置培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH為7.5、28℃是乳酸菌素lacticin518合成的

3、最優(yōu)環(huán)境因素，其中以發(fā)酵初始pH和發(fā)酵溫度的影響最大。
　　 在培養(yǎng)基成分單因素實驗的基礎上，利用響應面法對培養(yǎng)基各組成成分的濃度進行了優(yōu)化。單因素實驗表明乳酸菌素lacticin518合成的最佳碳、氮源分別為蔗糖和胰蛋白胨，吐溫80是乳酸菌素lacticin518產生最適合的刺激因子。通過Plackett-Burman實驗，探明了胰蛋白胨、磷酸二氫鉀和硫酸鎂是對乳酸菌素lacticin518的合成影響最大的培養(yǎng)基成分。通過快速

4、上升實驗和中心復合實驗，確定了最適培養(yǎng)基（g/L）為：蔗糖20，酵母粉5.0，胰蛋白胨8.18，牛肉膏10，硫酸鎂0.82，磷酸氫二鉀2.8，檸檬酸銨5.0，乙酸鈉5.0，硫酸錳0.25，吐溫805ml。
　　 研究了乳酸菌Lactc518的生長、乳酸菌素lacticin518的產生以及發(fā)酵產酸三者之間的耦聯性。在最適的發(fā)酵條件和最適培養(yǎng)基成分條件下，乳酸菌Lactc518的生長延滯期為2h，然后迅速的進入對數生長期，在12h時

5、菌株的生長進入穩(wěn)定期。乳酸菌素lacticin518在4h開始，在14h乳酸菌素lacticin518的效價達到頂峰，此時乳酸菌素lacticin518效價為180.13U/ml，較之最初始條件下乳酸菌素lacticin518效價96.72 U/ml，效價增加了86.3％。乳酸菌Lactc518在延滯期略微產酸，然后進入酸的高產期，10h后產酸能力逐漸減弱。乳酸菌Lactc518的生長、lacticin518的產生及發(fā)酵產酸三者之間為部