再生柞蠶絲素蛋白對(duì)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化生長(zhǎng)的支持作用.pdf

1、絲素蛋白是一種天然合成的高分子聚合物，作為手術(shù)縫線用于臨床已有一百多年的歷史。近年來(lái)，由于其低免疫原性，良好的生物相容性，緩慢的降解速度及特有的理化性質(zhì)，絲素蛋白作為一種新的生物材料應(yīng)用越來(lái)越受到歡迎。柞蠶絲素是除家蠶絲素外的另一大主要品種，在氨基酸組成上柞蠶絲素和家蠶絲素都主要由甘氨酸和丙氨酸兩種氨基酸組成，但柞蠶絲素中丙氨酸的含量比家蠶絲素要高，且含有豐富的精氨酸-甘氨酸-天門(mén)冬氨酸序列（RGD序列），更有利于細(xì)胞的粘附和生長(zhǎng)。間充

2、質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是干細(xì)胞的一種，是屬于中胚層的一類(lèi)多能干細(xì)胞，主要存在于結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，因能分化為間質(zhì)組織而得名，具有亞全能分化潛能。間充質(zhì)干細(xì)胞具有干細(xì)胞的共性：即自我更新，多向分化和歸巢的能力。在特定的環(huán)境下，能夠分化為多種組織細(xì)胞。而且易于富集和擴(kuò)增，不涉及倫理問(wèn)題，在細(xì)胞治療、組織器官修復(fù)、發(fā)育生物學(xué)、藥物等領(lǐng)域有著極為廣闊的應(yīng)用前景，已被越來(lái)越廣泛的應(yīng)用到組織工程中，是理想的種子細(xì)胞。隨著醫(yī)學(xué)生物研究地深入，細(xì)胞與基質(zhì)

3、材料的相互作用己成為組織工程中關(guān)注的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞株(C3H10T1/2)和綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠的羊水干細(xì)胞(GFP—mAFS)這兩種小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞為研究對(duì)象，探討再生柞蠶絲素蛋白對(duì)這兩種干細(xì)胞體外分化發(fā)育的支持作用。
　　 第一部分再生柞蠶絲素蛋白對(duì)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞株體外生長(zhǎng)和分化的研究
　　 目的：探討再生柞蠶絲素蛋白對(duì)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞株(C3HIOT1/2)體外生長(zhǎng)和分化的支持作用，為再生柞蠶

4、絲素蛋白應(yīng)用于組織工程學(xué)研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用再生家蠶絲素蛋白、再生柞蠶絲素蛋白、I型膠原、普通細(xì)胞培養(yǎng)板為研究對(duì)象，觀察小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞株(C3H10T1/2)在這四種生物材料上的粘附、生長(zhǎng)分化以及表面抗原的變化。利用光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)；MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖度；流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表型；誘導(dǎo)小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞(C3H10T1/2)向成脂肪細(xì)胞分化。
　　 結(jié)果：再生柞蠶絲素蛋白對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)、形態(tài)，細(xì)

5、胞表面抗原表達(dá)均無(wú)影響。MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示在培養(yǎng)第6天C3H10T1/2細(xì)胞在再生柞蠶絲素膜上的增殖明顯(P<0.05)。-C3H10T1/2細(xì)胞能向成脂肪細(xì)胞分化。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示再生柞蠶絲素蛋白在體外支持C3H10T1/2細(xì)胞的粘附，生長(zhǎng)和分化，具有很好的細(xì)胞相容性。
　　 第二部分再生柞蠶絲素蛋白對(duì)小鼠羊水干細(xì)胞體外生長(zhǎng)的研究
　　 目的：探討再生柞蠶絲素蛋白對(duì)小鼠羊水干細(xì)胞體外生長(zhǎng)的支持作用

6、，為再生柞蠶絲素蛋白應(yīng)用于組織工程學(xué)研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用再生柞蠶絲素蛋白和普通細(xì)胞培養(yǎng)板為研究對(duì)象，觀察小鼠羊水干細(xì)胞(GFP—mAFS)在這兩種生物材料上的粘附、生長(zhǎng)情況。利用倒置相差顯微鏡和倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。
　　 結(jié)果：再生柞蠶絲素蛋白對(duì)細(xì)胞的粘附和生長(zhǎng)形態(tài)均無(wú)影響。
　　 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示再生柞蠶絲素蛋白在體外支持GFP—mAFS細(xì)胞的粘附，生長(zhǎng)，具有很好的細(xì)胞相容性。