黃秋葵組織培養(yǎng)及胚性細(xì)胞懸浮體系的建立.pdf

1、黃秋葵學(xué)名Abelmoschus esculentus L.(Hibiscus esculentus L.)，屬錦葵科(Malvaceag)秋葵屬(belmoschus Medicus)一年生草本植物。它既是營養(yǎng)豐富的保健型蔬菜，又是療效顯著的常用中藥，還是觀賞價值頗高的綠化、美化材料。隨著對黃秋葵的營養(yǎng)價值及其藥用價值認(rèn)識的不斷深入，應(yīng)用前景日益廣闊，需求量與日俱增，市場效益顯著。因此對黃秋葵的組織培養(yǎng)技術(shù)的研究亦愈發(fā)得到重視，通過組

2、織培養(yǎng)，獲得優(yōu)質(zhì)材料，降低提取成本，為黃秋葵的利用提供參考。本研究以黃秋葵為試驗材料，采用黃秋葵當(dāng)年生莖段為外植體，誘導(dǎo)胚性愈傷組織，建立植株再生體系和胚性懸浮體系。獲得試驗結(jié)果如下： 1、以黃秋葵莖段為材料，誘導(dǎo)產(chǎn)生了胚性愈傷組織，建立了高頻再生體系。篩選出了黃秋葵外植體消毒滅菌的最佳處理組合為75％乙醇消毒30 S后，轉(zhuǎn)入0.1％HgCl2溶液中消毒8 min。適于胚性愈傷誘導(dǎo)及擴增最佳培養(yǎng)基MS(NH4NO3/2)+2.0

3、mg·L-12,4-D+3.0 mg·L-1ZT+3％蔗糖+0.7％琉脂。2,4-D在誘導(dǎo)胚性愈傷組織中是必需的。植物激素、氮源、糖源及光照條件對黃秋葵胚性愈傷組織形成有較大影響。 2、以胚性愈傷組織為材料，建立了穩(wěn)定的胚性細(xì)胞懸浮體系。試驗結(jié)果表明培養(yǎng)時期懸浮細(xì)胞生長規(guī)律符合典型的“S”形生長曲線，其最佳繼代周期為4～8 d。培養(yǎng)期懸浮細(xì)胞干重和pH之間、振蕩培養(yǎng)轉(zhuǎn)速和懸浮細(xì)胞形態(tài)之間都有一定的相關(guān)性。接種量和AgNO3含量對

4、懸浮細(xì)胞的生長有影響：最佳接種量為1.5％，最適AgN03濃度為5.0mg·L-1。 3、通過對胚性愈傷組織的分化培養(yǎng)，獲得黃秋葵再生植株。篩選出黃秋葵不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-12,4-D+3％蔗糖+0.7％瓊脂；壯苗培養(yǎng)基：MS+1.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 2,4-D+1.0 mg·L-1GA3+3％蔗糖+0.7％瓊脂；生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.1 m