雙歧桿菌脂磷壁酸抗體的制備及其在雙歧制品中的檢測應用.pdf

1、目的：制備雙歧桿菌脂磷壁酸抗體，運用血清學方法初步探討雙歧制品中脂磷壁酸和雙歧桿菌活菌的含量檢測，為后者建立一種快速經(jīng)濟簡單易行的可靠方法。 方法：預先培養(yǎng)足夠量的兩歧雙歧桿菌（Bifidobacterium bifidum，編號：86321），用非離子型去垢劑Triton x-114提取兩歧雙歧桿菌的脂磷壁酸，加甲基化牛血清白蛋白與佐劑超聲乳化，首劑免疫為完全佐劑，之后都用不完全佐劑。BALB/C小鼠隨機分為高中低三個劑量組。

2、先用卡介苗50μg/只注射小鼠進行多克隆激活，一周后第一次注射抗原，間隔兩周再注射一次，再隔一周第三次注射抗原。高中低組劑量分別為每只150μg，100μg，50μg。第一次抗原免疫之后每隔一周采血一次，間接ELISA法檢測抗體效價與特異性，觀察同兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌的反應性。用免疫血清經(jīng)雙抗體夾心ELISA法和免疫結合微量培養(yǎng)的方法分別檢測市售某品牌酸奶中脂磷壁酸和雙

3、歧桿菌活菌量 結果：小鼠在一周后有微量抗體產(chǎn)生，各組差別不大，但免疫時間越久，這種差別越大，總體來說抗原劑量越大，抗體效價越高，中高劑量組差別不明顯，免疫血清最高效價可達1：1280，與兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌免疫反應都是強陽性，但與嗜熱鏈球菌、保加利亞乳桿菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌皆為陰性?？?mBSA最高血清效價為1：0～16，可以忽略。小鼠在高劑量組出現(xiàn)急性變態(tài)反應，一般在30 min內發(fā)作、出現(xiàn)抽搐、呼吸困難

4、、瞳孔放大變色、心跳減弱甚至消失，有這些癥狀的死亡率很高，未死亡者2～6 h恢復生命體癥。其他組沒有出現(xiàn)過敏反應。對于酸奶中脂磷壁酸和雙歧桿菌活菌的含量檢測取得良好結果，活菌數(shù)值低于平板計數(shù)法結果，但相差不大。檢測線可達105cfu/ml。 結論：純化的LTA沒有免疫原性，但為一種很強的菌體抗原成份，加載體與佐劑能產(chǎn)生高效價抗體。該抗體是針對雙歧桿菌細胞膜上LTA的雙歧桿菌屬特異性抗體，可用于檢測存在于人和動物體內的雙歧桿菌，與