SUMO-1基因在肝癌診斷和治療中的價(jià)值研究.pdf

1、背景:SLIMO(small ubiquitin-like modifier)基因是泛素樣基因家族中的一員,主要參與蛋白質(zhì)翻譯后多種功能的修飾。和泛素(ubiquitin)結(jié)合底物蛋白后引起底物蛋白降解的作用不同,SLIMO蛋白和相應(yīng)的底物蛋白結(jié)合后不會(huì)引起底物蛋白的降解,而是調(diào)節(jié)底物蛋白的功能,在轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)、核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、染色體分離及染色體代謝等方面發(fā)揮重要調(diào)控作用。已發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多的和癌癥相關(guān)的蛋白都存在SLIMO-1修飾。增殖細(xì)胞

2、核抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)、p53、雌激素受體、NF-kappa B信號(hào)調(diào)節(jié)以及端粒酶活性維持都離不開(kāi)SUMO修飾作用的調(diào)節(jié)。SUMO-1修飾可抑制p53基因的活性,促使癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。抑癌基因p53在細(xì)胞的發(fā)生、分化、凋亡等方面發(fā)揮重要的作用,如果p53基因活性被抑制,細(xì)胞就容易發(fā)生癌變。P53基因缺失可引起多種癌癥的發(fā)生,但如失活的p53基因重新被激活,就可能使腫瘤

3、的生長(zhǎng)受到抑制甚至消亡。SUMO-1蛋白和癌癥的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。
　　 目的:鑒于SUMO-1基因在癌癥發(fā)生發(fā)展中的重要作用,本論文旨在研究SUMO-1基因在肝細(xì)胞性肝癌中的表達(dá)水平,并觀察沉默SUMO-1基因表達(dá)后對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響,并探討導(dǎo)致肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為變化的機(jī)制,評(píng)價(jià)SUMO-1基因在肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及潛在的診斷和治療肝癌中的應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：采用RT-PCR、Western

4、 blot方法在mRNA及蛋白水平檢測(cè)肝癌傳代細(xì)胞、臨床肝細(xì)胞性肝癌及癌旁肝組織標(biāo)本中SUMO-1基因的表達(dá)水平并比較這些組織中SUMO-1基因表達(dá)的差異。采用RT-PCR.的方法檢測(cè)外科切除的肝癌、癌旁肝組織、肝血管瘤及肝局灶性結(jié)節(jié)性增生中SUMO-1基因mRNA的表達(dá)水平并比較肝癌和癌旁肝組織之間、甲胎蛋白陰性和陽(yáng)性的肝細(xì)胞性肝癌之間、肝良惡性腫瘤之間的SUMO-1基因mRNA表達(dá)水平的差異。將人工合成的針對(duì)SUMO-1基因的siR

5、NA片段轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞SMMC-7721,采用RT-PCR、Westernblot方法在mRNA及蛋白水平檢測(cè)siRNA沉默肝癌細(xì)胞中SLIMO.1基因的效果。通過(guò)MTr、流式細(xì)胞儀及TUNEL試驗(yàn)檢測(cè)SUMO-1基因沉默后對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。采用RT-PCR、Westem blot方法檢測(cè)SUMO-1表達(dá)沉默后Bcl-2、c-myc在mRNA及蛋白水平的變化。
　　 結(jié)果：在mRNA及蛋白水平,SUMO-1基因在肝癌

6、傳代細(xì)胞SMMC-7721、Hep3B、HepG2及肝癌標(biāo)本中均明顯高表達(dá),而癌旁肝組織中SUMO-1基因表達(dá)明顯低,肝癌組織和癌旁肝組織中SUMO-1表達(dá)有明顯的差異(P＜0.001)。SUMO-1基因mRNA在肝癌及癌旁肝組織中都有表達(dá),但在肝癌中的表達(dá)水平顯著高于癌旁肝組織;在不同AFP水平的肝細(xì)胞性肝癌患者中SUMO-1基因mRNA均高表達(dá),差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在肝血管瘤及肝局灶性結(jié)節(jié)性增生中SUMO-1基因mRNA也有表達(dá),但

7、表達(dá)水平明顯低于肝癌。人工合成的針對(duì)SUMO-1基因的siRNA片段能顯著地抑制SMMC-7721中SUMO-1基因的表達(dá),48 h抑制率可達(dá)到73.43％。MTT結(jié)果顯示肝癌細(xì)胞SMMC-772l轉(zhuǎn)染SUMO-1 siRNA后生長(zhǎng)明顯受到抑制,流式細(xì)胞儀檢測(cè)G2期細(xì)胞明顯增加,但TUNEL試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞。轉(zhuǎn)染SUMO-1 siRNA后SMMC.7721中Bcl-2、c-myc及α-tubulin的表達(dá)均明顯的下調(diào)。
　　

8、結(jié)論：SUMO-1基因在肝癌中高表達(dá),SUMO-1可能為肝癌診斷和治療中的一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。在不同AFP水平的肝癌中,SUMO-1基因mRNA均明顯高表達(dá),而在癌旁肝組織及肝良性腫瘤中表達(dá)較低,SUMO-1基因mRNA可作為診斷肝癌的一個(gè)重要的標(biāo)志物。SUMO-1 siRigA沉默肝癌細(xì)胞SMMC-7721中SUMO-1基因效果良好,SUMO-1基因沉默后SMMC-7721生長(zhǎng)明顯受到抑制,Bcl-2和c-myc表達(dá)下調(diào),說(shuō)明SUMO-1