SUMO-1在肝纖維化發(fā)展相關(guān)信號通路中的調(diào)控作用.pdf

1、肝纖維化(hepatic fibrosis，HF)是一組常見的慢性肝疾病的臨床表現(xiàn)和病理學(xué)綜合征。在整個(gè)肝纖維化發(fā)生發(fā)展的過程中，肝臟細(xì)胞內(nèi)許多基因發(fā)生異常表達(dá)，并伴有發(fā)展為肝細(xì)胞癌的危險(xiǎn)性增加。在肝組織發(fā)生纖維化過程中，肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化增殖可謂是一個(gè)重要環(huán)節(jié)，而NF-kB(nuclear factor kappa B)及其調(diào)控系統(tǒng)又是介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。活化的HSCs內(nèi)

2、NF-kB活性增強(qiáng)，導(dǎo)致炎性因子表達(dá)增加，放大肝臟炎癥損傷反應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)了HSCs的活化；與此同時(shí)，NF-kB活性增強(qiáng)還可抑制HSCs凋亡。
　　 SUMO-1基因是小泛素相關(guān)修飾物(SUMO，small ubipuitin-like modifier)基因家族中的一員，SUMO-1通過共價(jià)連接修飾靶蛋白，并參與蛋白質(zhì)間的相互作用，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)靶蛋白分布及其功能。近年來的研究顯示，SUMO參與了NF-kB信號通路的調(diào)節(jié)，該通路中

3、重要的蛋白因子如IkBα、NEMO均可被SUMO化修飾；并且SUMO化修飾酶還可通過作為構(gòu)架蛋白與一些蛋白直接相互作用從而調(diào)控NF-kB信號通路。因此，如能探究SUMO-1在肝纖維化進(jìn)展過程中的作用及其在NF-kB信號通路的調(diào)控作用，那么通過抑制SUMO-1對NF-kB信號通路的修飾激活將對減少HSCs活化，促進(jìn)HSCs凋亡等將有著極為重要的意義，也可能對肝纖維化乃至肝癌的治療策略將產(chǎn)生積極影響。
　　 第一部分肝纖維化模型大鼠

4、肝臟中SUMO-1及P65的表達(dá)變化
　　 目的：探討肝纖維化模型大鼠肝臟中SUMO-1及P65的表達(dá)情況
　　 方法：將40只SD大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，造模組(n=22)和對照組(n=18)；造模組給予40％CC143μL/g四肢皮下注射，每周兩次，在同時(shí)間點(diǎn)對照組予同等量生理鹽水四肢皮下注射；于造模后4、8、12周末斷頸處死大鼠，每次處死大鼠造模組(n=6)和對照組(n=4)，留取肝組織；造模期間觀察大鼠一般情況。采用蘇

5、木精-伊紅染色(HE染色)觀察各組大鼠肝組織病理改變，免疫組化對SUMO-1表達(dá)進(jìn)行定位及觀察其相對量的變化，Real time-PCR檢測SUMO-1 mRNA的表達(dá)，Western blot檢測SUMO-1及p65蛋白水平。
　　 結(jié)果：隨著造模周期的延長，HE染色可見大鼠肝細(xì)胞變性至肝纖維化的形成，免疫組化可見SUMO-1在肝纖維化大鼠模型肝臟中表達(dá)且隨著時(shí)間推移表達(dá)趨勢逐漸增強(qiáng)。Real time-PCR顯示SUMO-1

6、 mRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng)，各組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot驗(yàn)證SUMO-1、p65表達(dá)逐漸增強(qiáng)，各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：隨著大鼠肝纖維化的形成SUMO-1及p65表達(dá)逐漸增高，二者可能在肝纖維變化過程中有重要作用，同時(shí)NF-kB信號通路活性的變化可能和SUMO-1的表達(dá)水平有關(guān)。
　　 第二部分 SUMO-1在大鼠肝纖維化相關(guān)NF-kB信號通路中的調(diào)控作用

7、r>　　 目的：初步探討SUMO-1在NF-kB信號通路的調(diào)控作用
　　 方法：將人工合成的針對SUMO-1基因的siRNA慢病毒、SUMO-1過表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞，采用Real time-PCR、Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染后肝星狀細(xì)胞中SUMO-1的表達(dá)狀況，并采用Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染各載體后肝星狀細(xì)胞后P65在蛋白水平的變化。
　　 結(jié)果：人工合成的針對SUMO-1基因的siRN

8、A慢病毒能抑制肝星狀細(xì)胞中SUMO-1基因的表達(dá)，而SUMO-1過表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞后SUMO-1表達(dá)增強(qiáng)。Western blot驗(yàn)證體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)染SUMO-1siRNA后p65表達(dá)下調(diào)，轉(zhuǎn)染SUMO-1過表達(dá)慢病毒載體后p65表達(dá)上升。
　　 結(jié)論：SUMO-1siRNA沉默肝星狀細(xì)胞中SUMO-1基因效果良好，SUMO-1基因沉默后P65表達(dá)下調(diào)，而SUMO-1過表達(dá)時(shí)p65表達(dá)上升，二者表達(dá)正相關(guān)，說