RACK1在肝纖維化調(diào)控中的功能和機制以及PQQ干預(yù)肝纖維化發(fā)生發(fā)展的研究.pdf

1、第一部分 RACK1在肝纖維化調(diào)控中的功能和機制
　　肝纖維化是指肝臟纖維結(jié)締組織的過度沉積，是細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)合成和降解不平衡的結(jié)果，是各種慢性肝病向肝硬化發(fā)展所共有的病理改變和必經(jīng)途徑。肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)從靜止狀態(tài)到激活的肌成纖維細胞的轉(zhuǎn)化被認為是肝纖維化發(fā)生的中心事件。HSCs在被激活后轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞形態(tài)，脂滴丟失，并大量合成E

2、CM，表達平滑肌動蛋白(α-SMA)，獲得收縮功能。HSCs的激活、凋亡受到眾多細胞因素及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。其中TGF-β1在促HSCs的激活和遷移過程中都起到重要作用，可以刺激HSCs產(chǎn)生Ⅰ型膠原，并通過自分泌和旁分泌環(huán)路反饋進一步增加其表達。經(jīng)典構(gòu)架蛋白RACK1（receptor for activated C-kinase1）參與許多信號通路及細胞事件;然而RACK1在肝纖維化中的作用卻沒有明確的研究。
　　我們的

3、實驗研究RACK1與肝纖維化之間的關(guān)系，通過體內(nèi)和體外的實驗結(jié)果證實，在激活的HSCs中RACK1的表達上調(diào)，并且是轉(zhuǎn)化生長因子-1(transforming growth factor beta1，TGF-β1)所依賴的。TGF-β1可通過活化NF-κB通路，刺激RACK1的表達;RACK1作為TGF-β1下游的靶基因，其過表達又可進一步促進TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs的激活和遷移，同時能也促進血小板源性生長因子(platelet-de

4、rived growth factor，PDGF)介導(dǎo)的HSCs的增殖和遷移。在小鼠的體內(nèi)實驗中我們也證實，RACK1的缺失抑制TAA誘導(dǎo)的肝纖維化的進展。另外，肝纖維化病人肝穿刺組織的免疫組化顯示，RACK1在HSCs中的表達與臨床病例的纖維化程度呈正相關(guān)。
　　因此，我們的實驗結(jié)果證實，RACK1作為TGF-β1下游的靶基因，參與肝纖維化進展的調(diào)節(jié)，因此RACK1也可能成為抗纖維化治療的潛在作用靶點。
　　第二部分 PQ

5、Q抑制肝纖維化發(fā)生發(fā)展的研究
　　肝纖維化是肝臟對各種慢性肝損傷做出的持續(xù)性的損傷修復(fù)反應(yīng)，這些損傷包括病毒、自身免疫、藥物誘導(dǎo)、膽汁瘀積和代謝性疾病，并以正常肝組織結(jié)構(gòu)逐漸被大量富含膠原的細胞外基質(zhì)所取代為特征。肝星狀細胞(hepatic stellatecells，HSCs)的激活是肝纖維化的中心事件。在肝臟損傷的情況下，活化的Kupfer細胞能夠釋放PDGF、TGF-β1等多種細胞因子，也可以產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物及活性氧簇(Re

6、active Oxygen Species，ROS)。正常的組織細胞有抗氧化系統(tǒng)，包括超氧物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等，它們能有效地清除過多的ROS以保持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。但當ROS過量產(chǎn)生的情況下，該平衡被打破，過量的ROS一方面能破壞脂質(zhì)，蛋白，DNA，誘導(dǎo)肝細胞的凋亡和壞死，使炎癥反應(yīng)放大。另一方面，ROS能激活HSCs并使其獲得較強的增殖能力，且處于持續(xù)活化狀態(tài)?？梢姡琑OS在介導(dǎo)

7、肝損傷和肝纖維化中發(fā)揮了重要作用。
　　吡咯喹啉醌(Pyrroloquinoline-quinone，PQQ)首先作為甲基營養(yǎng)菌中甲醇脫氫酶的輔酶被認識，也被發(fā)現(xiàn)可作為其它許多酶的輔酶，具有強抗氧化能力，能有效清除氧自由基。氧化應(yīng)激通過參與肝纖維化的眾多環(huán)節(jié)，促進肝纖維化的進展。因此，我們研究肝纖維化中，PQQ是否能通過其清除氧自由基的作用發(fā)揮抗纖維化的功能。我們證實了在TAA和BDL誘導(dǎo)的肝纖維化模型中，PQQ可改善肝功能，并可

8、提高肝臟的抗氧化酶GSH-Px，CAT，SOD的活性，并減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量;同時降低TAA誘導(dǎo)的α-SMA及Ⅰ型膠原的表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)，PQQ可減少枯否細胞的激活，炎癥因子的釋放，并發(fā)現(xiàn)PQQ減少ROS的產(chǎn)生可能由于減少Nox2和Duox1的表達。另外，在小鼠原代肝星狀細胞中，證實PQQ可以抑制TGF-β1和PDGF誘導(dǎo)的胞內(nèi)ROS水平的升高，同時，通過抑制p38和Smad2/3通路，抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HSCs的活化