兩種植物檢疫性丁香假單胞病原細菌的分子檢測技術研究.pdf

1、Pseudomonas syringae pv.pisi和Pseudomonas syringae pv.maculicola分別為豌豆細菌性疫病和十字花科細菌性黑斑病的致病菌，在我國均被列入《中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄》。本研究自主設計了針對這兩種病菌的特異性引物，建立了一套可靠、靈敏、快捷的分子檢測方法，有望從源頭上協(xié)助控制兩種檢疫性病菌的擴散，為我國的植物檢疫提供技術支撐。
　　本研究以150株包括兩種靶標菌在

2、內(nèi)的植物相關細菌為模板進行了常規(guī)PCR擴增，結果表明兩對特異性引物均沒有出現(xiàn)假陽性和假陰性。靈敏度測試結果表明常規(guī)PCR測定豌豆細菌性疫病菌純化DNA的檢測限為103fg/μl，菌懸液的檢測限為102CFU/ml。實時熒光定量PCR測定純化DNA的檢測限可達102fg/μl，菌懸液的檢測限達10CFU/ml。豌豆模擬帶菌活體樣本的檢測中，特異性引物能夠分別從植物粗提物的102倍(常規(guī)PCR)、103倍(實時熒光定量PCR)稀釋液中檢測到

3、靶標細菌。
　　以十字花科細菌性黑斑病菌的純化DNA及菌懸液梯度稀釋產(chǎn)物為模板進行的靈敏度測試中，常規(guī)PCR以及實時熒光定量PCR的檢測限均為102fg/μl和10CFU/ml。在模擬種子帶菌的檢測中，常規(guī)PCR對經(jīng)種子浸泡液稀釋過的菌懸液的檢測限為105 CFU/ml，實時熒光定量PCR的檢測限為103CFU/ml。模擬帶菌種子抽樣檢測的結果表明，常規(guī)PCR可以檢測出帶菌率為5％的種子樣本（即10 g種子中含0.5 g帶菌種子）