桑丁香假單胞菌穩(wěn)產(chǎn)冠菌素關(guān)鍵技術(shù)的研究.pdf

1、冠菌素是一種新型高效的生物源植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，噴施極低濃度的冠菌素，植物可獲得更高的抗逆性和抗病性，具有廣泛的應(yīng)用前景。利用丁香假單胞菌發(fā)酵是工業(yè)化生產(chǎn)冠菌素有效途徑之一，穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)冠菌素菌株是其前提。本文采用定量培養(yǎng)基技術(shù)對不同微生態(tài)環(huán)境下桑丁香假單胞菌密度分布進行了研究、采用重復(fù)序列PCR技術(shù)對不同生態(tài)型桑園桑丁香假單胞菌進行了分型研究和采用室溫常壓等離子體技術(shù)對產(chǎn)冠菌素菌株進行了誘變研究。結(jié)果認(rèn)為，在對桑園桑丁香假單胞菌敏感的桑品種

2、的桑樹葉片組織中，可更有效地篩選到高產(chǎn)冠菌素野生菌株；利用室溫常壓等離子體突變技術(shù)，可獲得穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)冠菌素突變體。研究結(jié)果對冠菌素規(guī)?；I(yè)發(fā)酵奠定了基礎(chǔ)。
　　1）從桑樹葉片組織中能更有效地分離獲得高產(chǎn)冠菌素野生菌株。
　　采用KBC選擇性培養(yǎng)基對不同地區(qū)樣品進行丁香假單孢菌野生菌株的篩選，對不同微生態(tài)環(huán)境下桑丁香假單胞菌密度分布進行了檢測。結(jié)果表明，桑樹葉片組織和桑園土壤中丁香假單胞菌的數(shù)量存在顯著性差異，桑樹葉片表現(xiàn)出較

3、大的桑丁香假單胞菌種群生長密度，這與桑疫病發(fā)生過程中丁香假單胞菌分泌冠菌素來調(diào)控植物葉片氣孔的侵染途徑和方式有關(guān)。該結(jié)果為桑疫病爆發(fā)期間從桑樹葉片組織中分離高產(chǎn)冠菌素的野生型丁香假單胞菌株找到了事實依據(jù)。
　　2）水系豐富的桑園是篩選到高產(chǎn)冠菌素野生菌株最有潛力的目標(biāo)源。
　　以REP通用引物構(gòu)建重復(fù)序列PCR技術(shù)，對本課題組菌種庫中江浙一帶篩選的產(chǎn)冠菌素野生菌株進行聚類分析和分型研究。結(jié)果表明，在相似系數(shù)為0.65時可將2

4、9株菌株分成5個類群，其中來自浙江淳安的桑樹組織中假單胞菌類群的多樣性程度高，可能與該地區(qū)水源充足的氣候條件有關(guān)，由此推測出野生菌株多樣性與地區(qū)水分條件可能具有一定的相關(guān)性，為后期篩選產(chǎn)冠菌素的桑丁香假單胞野生菌株提供了新思路。
　　3）常壓室溫等離子體誘變技術(shù)獲得高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)冠菌素的突變體菌株。
　　對野生型出發(fā)菌株的冠菌素產(chǎn)能進行分析，發(fā)現(xiàn)在即使高溫（32℃）下也能產(chǎn)冠菌素，但產(chǎn)量不穩(wěn)定，且產(chǎn)冠菌素特性退化明顯。采用常壓室溫

5、等離子體誘變技術(shù)對出發(fā)菌株進行誘變，采取通用培養(yǎng)基培養(yǎng)。結(jié)果表明，冠菌素產(chǎn)量提高了5％；突變株經(jīng)過10代傳代培養(yǎng)后，冠菌素產(chǎn)量仍維持在穩(wěn)定狀態(tài)，變化幅度控制在2.24%之內(nèi)，表現(xiàn)出工業(yè)化生產(chǎn)菌株的穩(wěn)產(chǎn)特性。因此，常壓室溫等離子體誘變技術(shù)在保持出發(fā)菌株高產(chǎn)性質(zhì)前提下有效地提高了菌株產(chǎn)量的穩(wěn)定性，為冠菌素的工業(yè)化生產(chǎn)菌株的高效選育提供了一種新穎、有效的新技術(shù)。
　　本文首次對生態(tài)型桑園微生態(tài)系統(tǒng)中桑丁香假單胞菌進行定量篩選，并將常壓室