臨床分離的銅綠假單胞菌對(duì)頭孢菌素類抗生素耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究臨床分離的62株銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥情況，并探討其對(duì)頭孢菌素類抗生素的耐藥機(jī)制。 方法：瓊脂二倍稀釋法測(cè)定7種β-內(nèi)酰胺類抗生素對(duì)銅綠假單胞菌的MIC值；水解Nitrocefin法定性初篩β-內(nèi)酰胺酶；ESBLs的表型確證試驗(yàn)初篩ESBLs；三維試驗(yàn)檢測(cè)高產(chǎn)AmpC酶；提取基因組DNA和質(zhì)粒DNA，用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶的類型：改良三維試驗(yàn)檢測(cè)酶抑制劑（克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦、苯

2、唑西林、乙二胺四乙酸）對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的抑制作用；轉(zhuǎn)化試驗(yàn)檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶基因是否具有轉(zhuǎn)移性；測(cè)定β-內(nèi)酰胺酶的活性單位；氰氯苯腙（CCCP）抑制試驗(yàn)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)銅綠假單胞菌對(duì)頭孢菌素類抗生素的主動(dòng)外排作用。 結(jié)果：臨床分離的62株銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南、美洛培南、頭孢吡肟、頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松的耐藥率分別為45.16％、29.03％、27.42％、30.64％、58.06％、58.0

3、6％、67.64％。有24株銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶，表型確證試驗(yàn)檢測(cè)出有3株產(chǎn)ESBLs，三維試驗(yàn)檢測(cè)出有3株高產(chǎn)AmpC酶。用PCR方法檢測(cè)出有19株產(chǎn)TEM型ESBLs，其中有1株僅合并產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)的DHA-1型AmpC酶，其中有1株合并產(chǎn)染色體介導(dǎo)的SHV型ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)的DHA-1型AmpC酶，無產(chǎn)CTX-M型ESBLs的菌株。他唑巴坦抑制ESBLs的作用強(qiáng)于克拉維酸和舒巴坦，而苯唑西林對(duì)AmpC酶的抑制作用較弱。攜帶有

4、質(zhì)粒介導(dǎo)的DHA-1型AmpC酶基因的感受態(tài)細(xì)胞E.coli DH5α水解Nitrocefin法陽(yáng)性。合用CCCP后有4株的MIC值較單用頭孢噻肟的MIC值下降了至少2個(gè)梯度，且這4株菌的MexAB-OprM的表達(dá)量較其余菌株高。 結(jié)論：臨床分離的62株銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南、美洛培南、頭孢吡肟、頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢曲松的耐藥率較高；產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）和主動(dòng)外排作用是這臨床分離的62株銅綠假單