天葵抗TMV有效成分提取分離及其制劑研究.pdf

1、煙草花葉病毒病是煙草種植業(yè)上的重要病害之一，由于植物病毒的絕對寄生性，使其難于防治，目前國內(nèi)外缺少高效的抗病毒藥劑。隨著人們生活水平的提高，環(huán)境問題備受關(guān)注?？共《緞┫虻投?、低殘、高效及環(huán)境和諧的方向發(fā)展是一種趨勢。本文從天葵(Semiaquilegiaadoxoides(DC)Makino)塊根中提取分離抗煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的活性成分，為植物源抗病毒活性成分的篩選提供重要的理論依據(jù)與實踐指導(dǎo)。

2、 在本實驗室以往研究的基礎(chǔ)上，通過繼續(xù)分離純化天葵有效組分，采用半葉枯斑法進(jìn)行活性追蹤，篩選出天葵萃取物中抗TMV的活性組分TK和有效成分TK-1；經(jīng)過劑型加工，初步研制出了20％TK水乳劑系列制劑。取得了一些有價值的試驗結(jié)果。 1.本研究對天葵萃取物的化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)地預(yù)試驗。結(jié)果表明：天葵初提物中含有糖類、有機(jī)酸、蒽醒、酚類、揮發(fā)油等成分。 2.采用半葉枯斑法測定了天葵萃取物抗TMV的生物活性。生物活性

3、結(jié)果表明，天葵萃取物抗TMV的生物活性隨處理時間不同而不同，抑制增殖作用結(jié)果說明TMV在接觸心葉煙后的2h內(nèi)是其侵染期，2h后TMV已經(jīng)侵染并已開始大量增殖。治療作用施藥時間以接種后1h處理為最佳。天葵提取物與等量的TMV混合30min后處理可達(dá)到最佳鈍化作用防治效果。 3.研究確定了天葵有效成分提取分離的一般方法和流程，即先將天葵根粉粗提物經(jīng)石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水依次萃取，然后采用薄層層析和柱層析相結(jié)合的方法分離。

4、氯仿萃取物浸膏(B)經(jīng)過氯仿-甲醇梯度洗脫(83:17)得有效組分B4-3，其保護(hù)和治療作用是52.54％和48.69％；乙酸乙酯萃取物浸膏(C)經(jīng)過氯仿-甲醇梯度洗脫(75：25)得有效成分C5-5，其保護(hù)和治療作用為42.98％和62.07％。 4.進(jìn)行了20％TK-1水乳劑系列制劑的研究，初步確定了2號水乳劑的配方及其質(zhì)量控制指標(biāo)。該水乳劑有效成分為。TK-1，溶劑為二甲亞砜，乳化劑為OX-7513，分散劑為乙二醇，抗凍劑

5、為羧甲基纖維素鈉，助劑為pH調(diào)節(jié)劑、增稠劑、著色劑、氣味調(diào)節(jié)劑。經(jīng)劑型加工和質(zhì)量檢測，各項質(zhì)量控制指標(biāo)良好。 5.研究了2號水乳劑在煙葉上的抗TMV生物活性。結(jié)果表明，在心葉煙(Nicotianaglutinosa)上的活體保護(hù)、治療和鈍化作用抑制率分別為62.05％、64.28％和68.64％；在普通煙K326(NicotianaTableacumvar)上抗TMV的防治效果為68.64％。2號水乳劑的ED50為724.44m