天葵萃取物對(duì)TMV及其寄主生化影響研究.pdf

1、煙草花葉病毒病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的重要病害之一，由于植物病毒的絕對(duì)寄生性，使其難于防治，目前國(guó)內(nèi)外缺少高效的抗病毒藥劑。隨著人們生活水平的提高，環(huán)境問題備受關(guān)注。植物源抗病毒劑低毒、低殘留、高效、與環(huán)境相和諧，是今后抗病毒劑發(fā)展方向。本文從中草藥——天葵(Semiaquilegiaadoxoides)塊根中提取分離抗煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的活性物質(zhì)，為抗病毒劑活性成分的篩選提供重要的理論依據(jù)與實(shí)踐指導(dǎo)。

2、 在師姐畢亞玲對(duì)天葵提取物對(duì)TMV活性研究基礎(chǔ)上，改進(jìn)了提取方法；采用半葉枯斑法以及成功摸索的酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行了生物活性測(cè)定，篩選出天葵萃取物中抗TMV的活性成分；通過測(cè)定寄主植物體內(nèi)幾種酶活性的變化來研究天葵萃取物對(duì)TMV的作用機(jī)理。取得如下結(jié)果： 1.本研究明確了對(duì)天葵化學(xué)成分的初提取(萃取)方法，先用95％無水乙醇冷凝回流提取天葵根粉，提取液依次萃取，得到天葵石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和

3、水部分，其萃取率分別為38.0％、7.5％、6.5％、2.4％、27.5％。 2用煙葉半葉枯斑法進(jìn)行對(duì)TMV活性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)濃度為10.0mg/ml天葵萃取物對(duì)侵染心葉煙的13.0μg/mlTMV具有一定的抑制效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：天葵萃取物有較強(qiáng)的治療作用，其中乙酸乙酯萃取物治療效果最好，離體效果、盆栽效果分別達(dá)71.41％、72.36％，均與對(duì)照藥液病毒A差異極顯著；石油醚萃取物與氯仿萃取物的盆栽抑制效果分別為50.26％、47

4、.01％，均與對(duì)照藥液病毒A差異顯著；但氯仿萃取物離體治療效果為52.69％，與對(duì)照藥劑差異不顯著。鈍化效果表明：乙酸乙酯萃取物的鈍化效果最好，達(dá)到69.67％，與病毒A差異極顯著；氯仿萃取物、石油醚萃取物鈍化效果分別為53.39％、49.86％，與對(duì)照藥液效果差異不顯著。保護(hù)作用中，離體效果較好的氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物，抑制效果分別是41.01％、35.4％，與對(duì)照藥劑差異極顯著；甕栽實(shí)驗(yàn)中，氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取

5、物抑制效果分別為42.04％、41.83％、37.14％，均與對(duì)照藥劑病毒A差異極顯著。 3.用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行天葵萃取物對(duì)TMV生物活性測(cè)定結(jié)果進(jìn)一步表明：處理后寄主植物病毒侵染量達(dá)到最高值的時(shí)間推遲；處理后對(duì)寄主植物癥狀有較好的減輕效果。本試驗(yàn)在保護(hù)作用中，石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、病毒A處理寄主植物后病毒OD(于492nm光密度)值在第5天達(dá)到最大值，而陽性對(duì)照在3天出現(xiàn)最大值，說明處理能延

6、遲TMV侵染時(shí)間。氯仿萃取物保護(hù)效果較好，且優(yōu)于其他處理效果，其最大OD值僅為0.073，其次為石油醚萃取物、病毒A、乙酸乙酯萃取物。在治療作用中，寄主植物的病毒侵染量在前7天呈上升趨勢(shì)，在第7天達(dá)到最大，然后減少；其中乙酸乙酯萃取物的作用效果最好(病毒OD值為0.128，最小)，其次病毒A、石油醚萃取物、氯仿萃取物。 同一時(shí)間對(duì)寄主植物進(jìn)行處理，處理后不同間隔期接種病毒，接種后第3天采樣測(cè)定。結(jié)果表明：處理后隨著接種間隔期的延

7、長(zhǎng)，病毒侵染量呈上升趨勢(shì)，天葵萃取物對(duì)TMV的抑制能力與病毒OD值呈負(fù)相關(guān)。不同處理后第1天接種病毒，其OD值大小為氯仿萃取物(0.053)、石油醚萃取物(0.094)、乙酸乙酯萃取物(0.150)、病毒A(0.146)。處理后接種TMV，間隔期越長(zhǎng)天葵萃取物的抑制能力越弱。施用乙酸乙酯萃取物對(duì)TMV抑制作用時(shí)間最長(zhǎng)，達(dá)18天左右；石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物作用時(shí)間約13天；病毒A、水部分僅有8天。 4.研究了天葵萃

8、取物處理寄主后體內(nèi)生理生化變化。結(jié)果表明：經(jīng)保護(hù)作用煙葉中CAT酶活性先下降再上升，第5天達(dá)到高峰，之后迅速下降，且均低于空白對(duì)照，空白對(duì)照在第3天達(dá)到高峰。POD和SOD活性變化趨勢(shì)呈先上升后下降，處理后的曲線均低于空白對(duì)照。處理后不僅推遲2天達(dá)到最大病情，而且減輕了病癥；石油醚萃取物保護(hù)作用最好，其次是氯仿萃取物、病毒A、乙酸乙酯萃取物。經(jīng)治療作用煙葉中CAT活性變化趨勢(shì)先下降后上升，POD和SOD酶活性變化趨勢(shì)先升高后下降再升高。