成年枇杷葉柄及葉脈培養(yǎng)中防止褐化及愈傷組織誘導(dǎo)的研究.pdf

1、本研究以十年生‘大五星’枇杷樹的幼嫩葉片為試材，對葉柄及葉脈離體培養(yǎng)中褐化控制、愈傷組織誘導(dǎo)及愈傷組織繼代培養(yǎng)進(jìn)行了研究。研究內(nèi)容包括:外植體表面滅菌方法、葉齡選擇、葉柄及葉脈部位選擇、葉片4℃低溫處理、MS培養(yǎng)基（大量元素）濃度、抗褐化物質(zhì)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、生長調(diào)節(jié)劑的濃度、暗培養(yǎng)、低溫培養(yǎng)、轉(zhuǎn)瓶以及愈傷組織繼代培養(yǎng)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.外植體表面滅菌以75％酒精消毒時間為10s、0.1％升汞消毒時間為8min時

2、，滅菌效果最好。此時葉柄及葉脈污染率和褐化率均較低，分別為14.44％和8.89％，而葉柄及葉脈成活率、愈傷組織誘導(dǎo)率較高，均為76.67％。
　　2.葉齡及部位選擇:中度成熟(10d)葉片的葉柄為最理想的材料，成活率、愈傷組織誘導(dǎo)率較高，分別為55.56％、53.33％，且誘導(dǎo)的愈傷組織結(jié)構(gòu)較緊密，淡綠色，生理狀態(tài)較好。
　　3.最佳抗褐化處理:以在1/8MS培養(yǎng)基，PVP1.5mg/L，接種前不經(jīng)過4℃低溫處理的組合下，

3、褐化率最低，為11.11％，存活率和愈傷組織發(fā)生率最高，分別為80.00％、77.78％。
　　4.枇杷葉柄及葉脈初代培養(yǎng)的最佳配方為:MS+6-BA1.0mg/L+2，4-D1.5 mg/L+NAA0.4 mg/L，在此配方中葉柄及葉脈褐化率較低，為17.78％，存活率和愈傷組織發(fā)生率最高，均為72.22％。
　　5.外植體最佳的培養(yǎng)條件及轉(zhuǎn)瓶時間為:外植體接種后在20℃溫度下培養(yǎng)，暗培養(yǎng)兩周，5d轉(zhuǎn)瓶一次，其褐化率最低，