凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導中的褐變控制研究

1、凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導中的褐變控制研究凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導中的褐變控制研究【摘要】【摘要】目的研究愈傷組織誘導過程中的褐變問題。方法：將采集的標本進行外植體滅菌法再接種到培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加抗褐變劑，進行防褐變試驗。結果外植體在4℃冰箱冷藏48h的預處理對褐變有較好的控制效果。在培養(yǎng)基中加入抗褐變劑比加入吸附劑抗褐變效果好，抗褐變劑中Vc的效果最佳，吸附劑PVP比活性炭好。結論培養(yǎng)條件，以低溫遮光處理效果較好，光、溫兩個因素中，凹

2、葉厚樸對光敏感，遮光能有效抑制褐變。液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉入固體培養(yǎng)抗褐變的效果比單純的固體培養(yǎng)效果好。【關鍵詞】【關鍵詞】1.1.凹葉厚樸凹葉厚樸（拉丁名：Magnoliaofficinalissubsp.biloba(Rehd.etWils.)ChengetLaw中文名：凹葉厚樸拉丁科名：Magnoliaceae中文科名：木蘭科中文屬名：木蘭屬海拔下限：400(米)海拔上限：1200(米)保護級別：國家Ⅱ級重點保護野生植物（國務

3、院1999年8月4日批準）保護措施：產地有關部門亦應采取保護措施）；2.2.莖段；莖段；（愈傷組織中文名稱：愈傷組織英文名稱：calluscalli(復)定義：原指植物體受傷時產生于傷口周圍的組織?，F(xiàn)多指切取植物體的一部分，置于含有生長素和細胞分裂素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，誘導產生的無定形的組織團塊。應用學科：細胞生物學（一級學科）；細胞培養(yǎng)與細胞工程（二級學科）；3.3.褐變控制褐變控制；4.4.冷藏外植體冷藏外植體；5.抗褐變劑；抗褐變劑；

4、6.6.吸附劑：吸附劑：（吸附劑是能有效地從氣體或液體中吸附其中某些成分的固體物質。吸附劑一般有以下特點：大的比表面、適宜的孔結構及表面結構；對吸附質有強烈的吸附能力；一般不與吸附質和介質發(fā)生化學反應制造方便，容易再生；有良好的機械強度等。吸附劑可按孔徑大小、顆粒形狀、化學成分、表面極性等分類，如粗孔和細孔吸附劑，粉狀、粒狀、條狀吸附劑，碳質和氧化物吸附劑，極性和非極性吸附劑等。）7.7.液體淺層靜置培養(yǎng)液體淺層靜置培養(yǎng)凹葉厚樸Maga

5、noliabiloba（RehdetWils）cheng為木蘭科植物，以干燥根皮及枝皮入藥，有燥濕消痰、下氣除滿功效，用于治療濕滯傷中、消化不良、嘔吐瀉痢、痰飲咳喘等病癥。近年來，凹葉厚樸野生資源瀕臨枯竭，已被列為國家Ⅲ級保護植物。劉賢旺等[1]對凹葉厚樸進行了組織培養(yǎng)及愈傷組織超低溫保存的研究，為凹葉厚樸的資源再生和種質保存提供了寶貴的技術資料和理論依據。在此基礎上開展試驗，發(fā)現(xiàn)在凹葉厚樸莖段組織培養(yǎng)過程中，褐化現(xiàn)象嚴重，需要多次轉瓶

6、才能誘導出愈傷組織。鑒于此，筆者專門針對凹葉厚樸莖段組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的褐變現(xiàn)象進行了一系列比較試驗，現(xiàn)報道如下。1材料與方法材料與方法1.1外植體及培養(yǎng)基4月底采自湖南省森林植物園，以嫩枝頂芽及稍下的莖段作外植體。愈傷組織的誘導采用劉賢旺的實驗結果，即：B52，4D2mgL6BA1mgL蔗糖30gL，pH5.8~6.0。每次處理10瓶，每瓶5個外植體，外植體大小約為0.6cm0.6cm。護劑[4]1617，防止褐變的效果比無機吸附劑活性炭

7、好。（3）培養(yǎng)條件以低溫遮光處理效果較好，光溫兩個因素中，凹葉厚樸對光敏感，遮光能有效抑制褐變，這可能是在黑暗條件下，阻斷了酚類物質的生化合成途徑，降低了酚類化合物的含量，同時抑制了PPO活性，減輕了酚類物質的氧化有關[4]18，光照會提高PPO的活性，促進酚類物質的氧化。溫度對褐變造成的影響有兩個方面的原因：較低的溫度有利于傷口的愈合；另外，會降低PPO的生物活性，從而減輕褐變[2]63。（4）液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉入固體培養(yǎng)比單

8、純的固體培養(yǎng)效果好，前期的液體淺層靜置培養(yǎng)使傷口處外溢的酚類物質能迅速擴散到培養(yǎng)液中去，減輕了醌類物質在外植體四周的聚集，自體抑制效應減弱。【參考參考文獻文獻】[1]劉賢旺，杜勤，賴學文.凹葉厚樸組織培養(yǎng)的研究[J].江西林業(yè)科技，1997，（2）：14.[2]于守超趙蘭勇王芬，等.植物組織培養(yǎng)中外植體褐變機理研究進展[J].山東林業(yè)科技，2004，(5).[3]蘇夢云姜景民.樂東擬單性木蘭莖段愈傷組織誘導與褐變控制的研究[J].林業(yè)科