大鼠皮膚挫傷后自體吞噬和代謝物變化與損傷經(jīng)歷時間的研究.pdf

1、目的：1．研究大鼠皮膚損傷后局部組織和細胞中Beclinl(自噬誘導蛋白)、LC3(自噬標記蛋白)的表達，觀察大鼠皮膚損傷后局部細胞自體吞噬現(xiàn)象的變化；研究Beclinl、LC3損傷后表達的時序性，探討在法醫(yī)學損傷經(jīng)歷時間推斷中的應用。 2．運用核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)技術檢測大鼠皮膚損傷后局部代謝物的變化，探討該檢測技術在法醫(yī)學損傷研究中的應用。 方法：實驗動物隨機分成正

2、常組及損傷組，每組7～10只；損傷組按皮膚挫傷后致處死時間的不同分為損傷3小時組、6小時組、12小時組、18小時組、24小時組、3天組、5天組、7天組、10天、14天組及死后損傷組；皮膚挫傷方法為：用止血鉗夾住背部皮膚致皮下出血。以下為各部分的實驗方法： 實驗一：大鼠皮膚挫傷后細胞自噬現(xiàn)象的觀察。利用免疫印跡技術分析皮膚挫傷后局部自噬相關蛋白Beclinl、LC3表達的變化。 實驗二：大鼠皮膚挫傷后局部細胞內Beclin

3、l、LC3表達時序性研究。通過免疫組化方法觀察大鼠皮膚挫傷不同時間段后損傷皮膚中細胞內Beclinl、LC3的表達；并通過圖像采集、統(tǒng)計分析，研究細胞損傷后Beclinl、LC3表達量與損傷經(jīng)歷時間的關系。 實驗三：大鼠皮膚挫傷后代謝物變化與損傷經(jīng)歷時間的研究。皮膚組織樣品置于高分辨率魔角旋轉(high-resolution magic angle spinning，HRMAS)探頭上進行檢測；使用預飽和(脈沖序列：zgpr)和

4、CPMG(脈沖序列：cpmgpr)兩種方法分別對皮膚組織的核磁共振譜進行分析。 結果：1．損傷2周內皮膚組織相比正常皮膚組織兩種蛋白的表達呈顯著變化：Beclinl表達增多；LC3 IF/LC3 I值增高。 2．Beclinl、LC3表達于大鼠上皮細胞的胞漿內，少見表達于皮下組織的各細胞內；大鼠皮膚挫傷6小時后局部表皮細胞Beclinl、LC3表達開始增多，在挫傷18小時、1天、3天、5天、7天、10天呈強表達，傷后14

5、天表達減弱。 3．損傷大鼠、非損傷大鼠皮膚組織的NMR圖譜之間存在差異，表現(xiàn)在波峰數(shù)量、位置等方面的改變，局部亦觀察到新的波譜。 結論：1．皮膚損傷后局部細胞自體吞噬增強，細胞的自體吞噬是細胞應對損傷的一種反應。 2．損傷后Beclinl、LC3表達與損傷經(jīng)歷時間呈較強的相關性；Beclinl、LC3可作為法醫(yī)學損傷經(jīng)歷時間推斷的生物學指標。 3．運用核磁共振技術對組織中代謝物的檢測可為法醫(yī)學損傷研究提供新的思路