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文檔簡介
1、本實驗的目的是研究HO-1在保護細胞凋亡中的作用,探討其產(chǎn)生保護作用的機理。實驗中將克隆了HO-1基因的質(zhì)粒pcDNA3HO-1用DOTAP包裹轉入人血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)中進行表達。質(zhì)粒表達一段時間后采用TNF-α誘導細胞凋亡,以流式細胞儀測定細胞凋亡率。在質(zhì)粒轉染進細胞后,用細胞裂解液破碎細胞, SDS-PAGE鑒定表達量。通過設置質(zhì)粒轉染的時間梯度和濃度梯度,找出質(zhì)粒表達的最佳條件。再通過在各個條件下細胞凋亡率的對比,證明H
2、O-1抗凋亡的能力。在未用任何刺激劑的條件下,未轉染進HO-1cDNA的細胞的凋亡率是轉染進的5-23倍。采用用Hemin 和SnPP分別刺激細胞,促進和抑止HO-1在細胞中的表達。實驗結果顯示經(jīng)Hemin處理過的細胞的凋亡率均在20%以下,而SnPP處理過的細胞的凋亡率大幅的上升,最高可達到95%以上。整個數(shù)據(jù)顯示HO-1的表達被抑止時細胞的凋亡率是HO-1的表達被誘導時的5-20倍左右。實驗證明細胞的凋亡率與質(zhì)粒的轉染效率成反比,H
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