山羊乳腺上皮細(xì)胞系的建立與培養(yǎng).pdf

1、本實(shí)驗(yàn)采用組織塊和酶消化法分離山羊乳腺上皮細(xì)胞，對純化的細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞克隆并鑒定，采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，MTT顯色法定量探索山羊乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的最適條件，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)與聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定乳腺上皮細(xì)胞是否具有正常的生理功能，最終成功建立了山羊乳腺上皮細(xì)胞系。 試驗(yàn)一使用組織塊和酶消化法分離山羊乳腺細(xì)胞，結(jié)果表明組織塊培養(yǎng)可以分離純化出增殖能力較強(qiáng)的上皮細(xì)胞，Ⅰ型膠原酶和透明質(zhì)酸酶聯(lián)合使用可獲得較純的上皮細(xì)胞，

2、貼壁后增殖能力較強(qiáng)，但多次傳代后細(xì)胞增殖能力有所下降。刮除法、相差消化法以及相差貼壁法三種方法聯(lián)合使用，經(jīng)過2-3次傳代可以得到細(xì)胞形態(tài)均一的乳腺上皮細(xì)胞。 試驗(yàn)二本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行乳腺上皮細(xì)胞單細(xì)胞克隆，發(fā)現(xiàn)口吸管法、克隆環(huán)法和細(xì)胞稀釋法細(xì)胞克隆率分別為O、5.9％和3.5％，一共得到3株細(xì)胞克隆，形態(tài)學(xué)觀察與細(xì)胞角蛋白18鑒定為乳腺腺泡上皮細(xì)胞?？寺…h(huán)法細(xì)胞克隆率最高，但是操作很難熟練進(jìn)行，易導(dǎo)致克隆細(xì)胞的不純。細(xì)胞稀釋法操作簡單易

3、行，對細(xì)胞傷害小，克隆率較高。 試驗(yàn)三采用五因素五水平的二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，MTT顯色法定量研究不同濃度的胎牛血清(FBS)、氫化可的松、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、表皮生長因子(EGF)對山羊乳腺上皮細(xì)胞生長的影響，研究發(fā)現(xiàn)山羊乳腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)的最適條件為12％胎牛血清、4μg/ml氫化可的松、10μg/ml胰島素、8μg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白及6ng/ml表皮生長因子的DMEM/F12。 試驗(yàn)四使用催乳素誘導(dǎo)種在鋪有膠原的培