NF-κB“圈套”對癲癇大鼠腦內COX-2調控作用的研究.pdf

1、癲癇(Epilepsy)給患者帶來的巨大傷害是由癲癇反復發(fā)作(Seizure)所引起的腦損傷，而癲癇的腦損傷的主要原因是由癲癇發(fā)作所引起的腦內炎癥反應。關于癲癇的腦內炎癥反應機制，近年來的研究報道顯示，癲癇的炎癥反應與腦內環(huán)氧化酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)的表達增加及前列腺素(PGs)水平增高有著密切關系，COX-2為PGs合成的限速酶，被激活后不僅可產生氧化應激反應，還可將花生四烯酸轉化為PGs等有害物質，雖

2、然COX-2可被促炎性因子和某些與炎癥反應有關的生長因子所誘導，但在中樞神經系統(tǒng)及癲癇動物腦內COX-2的激活調節(jié)機制還并不十分清楚。 核轉錄因子(NF-кB)的激活可高效誘導靶基因的轉錄，調節(jié)著諸多參與免疫、炎癥反應因子如細胞粘附分子、細胞因子等的表達，在炎癥和免疫反應中起著調控作用，已有研究證明在癲癇的腦損傷中NF-кB起著重要作用。但是在癲癇發(fā)作過程中是否由于NF-кB的激活，從而調控了其下游靶基因之一COX-2的高表達，

3、才導致了腦內的炎癥反應和一系列病理變化尚無明確報道。 目的：本研究設計并合成與核轉錄因子NF-кB順式元件相一致的雙鏈寡聚脫氧核苷酸(кB-decoy)和相應的無關序列(錯配-decoy)，用這種核轉錄因子“圈套”策略抑制NF-кB的活性，通過研究癲癇大鼠腦內NF-кB的活性被抑制時COX-2的表達情況，明確癲癇的腦損傷病理變化與NF-кB活性和COX-2表達的相關性以及NF-кB在癲癇中對COX-2表達的調控作用，以進一步了解

4、癲癇的腦內病理改變機制。 方法：選用體重為250-300g的健康成年SD雄性大鼠，將其隨機分為3組即(1)實驗組(注射кB-decoy組)、(2)對照組(注射錯配-decoy組)、(3)正常組(注射生理鹽水組)。кB-decoy-ExGen500復合物和錯配-decoy-ExGen500復合物由大鼠腦立體定位儀于腦室內微量注射，采用氯化鋰。匹羅卡品(40mg/kg)制備大鼠癲癇模型，癲癇發(fā)作后選取不同的時間點的大鼠灌流固定，免疫

5、組化方法測定NF-kB和COX-2在腦內癲癇敏感腦區(qū)的活性，RT-PCR測定COX-2的表達。 結果：NF-kBp65免疫組化結果顯示：與對照組相比，實驗組大鼠海馬結構CA1區(qū)、CA3區(qū)和齒狀回門區(qū)神經元胞漿中免疫陽性染色明顯增強； NF-kB未發(fā)生核轉移，其活性被抑制。COX-2免疫組化結果顯示：與對照組相比，實驗組大鼠海馬神經元的免疫陽性染色明顯減弱；COX-2的表達水平低于對照組。RT-PCR結果顯示：與對照組相比，在癲癇