美洲商陸抗病毒蛋白基因遺傳轉化甘蔗的研究.pdf

1、甘蔗[SaccharumoffcinarumL.)是我國最重要的糖料作物和經濟作物，同時也是一種重要的能源植物。甘蔗花葉病(SugarcaneMosaicVirus,ScMV)是甘蔗中較為重要的病害之一，傳統(tǒng)的化學防治效果不佳，在我國許多甘蔗品種其發(fā)病率接近100％，使得甘蔗的產量和含糖量降低，嚴重影響甘蔗的經濟效益。利用植物基因工程技術把抗病毒基因導入甘蔗優(yōu)良品種中使其得到有效表達從而表現(xiàn)出抗病性是防治甘蔗病毒病最為有效的途徑。

2、 美洲商陸抗病毒蛋白(pokeweedantivirualprotein，PAP)是從美洲商陸(PhytolaccaamericanaL.)春葉中分離得到的一種單鏈核糖體失活蛋白，它可以催化水解原核和真核核糖體的大亞基rRNA3-端莖環(huán)(stem-loop)結構中的腺嘌呤殘基，導致核糖體失活。PAP可以有效的抑制多種非相關病毒，包括植物病毒和動物病毒，它是當前所有的核糖體失活蛋白(RIPs)中最有效的抗病毒蛋白。成熟的PAP全長262

3、個氨基酸，其中C端的25個氨基酸為毒性區(qū)，缺失突變體PAP-c沒有毒性區(qū)，其細胞毒性很低，但仍具有較強的抗病毒活性。因此，將美洲商陸抗病毒蛋白基因(pap-c)導入高產高糖的甘蔗品種中，使其在葉片中特異表達，可提高甘蔗廣譜的抗病毒能力。 本研究構建了rbcS啟動子驅動的美洲商陸抗病毒蛋白基因的植物表達載體pNRPL，然后利用"凍融法"導入超毒性農桿菌株EHA105，再通過農桿菌介導法對甘蔗胚性愈傷組織進行轉化，經過PPT抗性篩選