哈茨木霉多菌靈抗性菌株的構(gòu)建及其對水稻立枯病的防治.pdf

1、由于化學(xué)農(nóng)藥造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，生物農(nóng)藥越來越受到人們的關(guān)注。但是，生物農(nóng)藥防治效果較慢，使農(nóng)業(yè)生產(chǎn)承擔(dān)了很大的風(fēng)險。因此，化學(xué)農(nóng)藥與生物農(nóng)藥復(fù)合使用已成為目前植物病害防治的一條新途徑。哈茨木霉（Trichodermaharzianum）是一種優(yōu)良的植物病害防治真菌，由于對苯并咪唑類殺菌劑的高度敏感性，限制了其與殺菌劑的復(fù)合使用。因此獲得具有殺菌劑抗性的優(yōu)良菌株，研究抗性菌株與殺菌劑協(xié)同作用防治植物病害，對新型菌藥混配劑的開發(fā)和應(yīng)用具

2、有重要的理論與實踐意義。
　　使用簡并PCR和反向PCR方法，從哈茨木霉（T.harzianum）基因組DNA中擴(kuò)增出了α-、β1-、β2-和γ-微管蛋白基因序列。BlastP比對結(jié)果顯示，4條基因推測的氨基酸序列與其它真菌的相應(yīng)氨基酸序列均具有較高的同源性，與粗糙脈孢菌（Neurosporacrassa）的同源性分別達(dá)93％、92%、92%和90%。通過序列分析確定了各微管蛋白氨基酸的保守結(jié)構(gòu)域和典型基序的位置，對蛋白的二級結(jié)構(gòu)

3、和三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測。
　　采用PEG-CaCl2介導(dǎo)的原生質(zhì)體法，成功地將BenR基因轉(zhuǎn)化到哈茨木霉（T.harzianum）β2-微管蛋白基因位點，獲得了具有多菌靈抗性的菌株。Southernblot分析結(jié)果表明，BenR基因已經(jīng)整合到哈茨木霉（T.harzianum）基因組DNA中，并穩(wěn)定遺傳；抗性水平檢測結(jié)果顯示，抗性菌株可以在1500μg/mL的多菌靈濃度下生長，多菌靈抑制菌絲生長的有效中濃度達(dá)471.26μg/mL，抑

4、制孢子萌發(fā)的有效中濃度達(dá)307.21μg/mL，比原菌株提高了1200倍以上。
　　對哈茨木霉（T.harzianum）抗性菌株的主要生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，各抗性菌株的最適生長溫度、最適產(chǎn)孢溫度及分生孢子萌發(fā)的適宜溫度均為25℃～30℃；各菌株對pH的適應(yīng)范圍較廣，但偏酸性條件有利于菌絲生長、分生孢子產(chǎn)生及孢子萌發(fā)；光照對產(chǎn)孢具有明顯的促進(jìn)作用；在測定的多菌靈濃度下各菌株可以生長、產(chǎn)孢并孢子萌發(fā)，但隨多菌靈濃度的升高逐漸

5、降低；菌株TS1分生孢子產(chǎn)生的最佳固體發(fā)酵條件為：麩皮與秸稈比例為2∶1、培養(yǎng)基含水量為55%、接種量為25%，培養(yǎng)溫度為26℃，在此條件下發(fā)酵產(chǎn)生的分生孢子可達(dá)15.42×108個/g；抗性菌株對噻菌靈、苯菌靈和甲基托布津表現(xiàn)正交互抗藥性。
　　通過室內(nèi)拮抗實驗及室內(nèi)防效測定，得出以下結(jié)論：哈茨木霉（T.harzianum）各抗性菌株抑菌譜廣，對供試的8種植物病原菌均具有一定的抑制作用，其中抗性菌株TS1對水稻立枯病病原尖孢鐮刀

6、菌（Fusariumoxysporum）和立枯絲核菌（Rhizoctoniasolani）菌絲生長抑制率分別達(dá)81.34%和86.19%；抗性菌株TS1與多菌靈復(fù)合處理對水稻苗期立枯病的室內(nèi)防效最高，為82.25%，比單獨處理分別提高了22.82%和11.24%。
　　生防真菌對水稻幼苗根部與抗病相關(guān)的主要防御酶的誘導(dǎo)研究表明，抗性菌株TS1和多菌靈復(fù)合處理的POD、PAL、PPO及SOD活性均高于對照，但除SOD外，各酶活性與用

7、菌株TS1單獨處理時相比無顯著差異，這表明復(fù)合處理可以激發(fā)水稻的防衛(wèi)反應(yīng)，誘導(dǎo)系統(tǒng)獲得抗性，但對酶活的誘導(dǎo)無普遍增效作用；與原菌株相比，哈茨木霉（T.harzianum）抗性菌株TS1對POD、PAL及PPO活性的誘導(dǎo)持續(xù)期延長。
　　研究了抗性菌株TS1與多菌靈復(fù)合處理對水稻苗期立枯病的田間防效及菌株TS1在水稻根際的定殖能力。結(jié)果表明，3種配比的復(fù)合處理對病害防治均具有增效作用，但配比不同增效程度不同，其中6∶4配比增效作用最