棘球蚴自然抗原和卡介苗對(duì)Th1-Th2轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：模擬自然環(huán)境下泡球蚴感染的過程，通過觀察Th1/Th2關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子（T-bet和GATA-3）和其標(biāo)志性細(xì)胞因子在卡介苗和棘球蚴自然抗原免疫及免疫后再用泡球蚴原頭蚴攻擊感染昆明鼠模型的表達(dá)水平，探討包蟲病感染對(duì)中間宿主的抗感染免疫和免疫病理反應(yīng)在不同情況下的調(diào)節(jié)機(jī)制，并評(píng)估其對(duì)宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響。
　　方法：建立昆明小鼠動(dòng)物模型：用實(shí)驗(yàn)室常規(guī)制備的含0.1mg/ml蛋白的單房棘球蚴囊液抗原和泡球蚴組織提取抗原以皮下注射的

2、方法免疫昆明小鼠，初始免疫量為0.2mg/每只，每一個(gè)月加強(qiáng)免疫量為0.1mg/每只。用市售的卡介苗（BCG）免疫方法同前（0.05mg/每只注射）。取一半的免疫后小鼠作泡球蚴原頭蚴的攻擊感染，感染方采用腹腔內(nèi)注射2000個(gè)原頭蚴（PBS稀釋）。上述所有組各為20只鼠，雌雄各半。設(shè)PBS注射的空白對(duì)照和不作免疫的感染對(duì)照。各組10只雌雄各半。動(dòng)物模型的處理和標(biāo)本的收集：攻擊感染四個(gè)月后，所有的鼠用乙醚麻醉處死前取血，然后立即取肝脾臟放入

3、RNALater保存液中。處死后記錄一般狀況并檢查個(gè)器官狀態(tài)和感染病灶的分布，大小等情況；所取得的標(biāo)本放置于-800C備用。用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)脾組織中GATA-3及T-bet的mRNA表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中白介素4（IL-4）、γ干擾素（IFN-γ）、白介素2（IL-2）、白介素6（IL-6）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、白介素10（IL-10）和白介素17（IL-17）的含量。所

4、有的數(shù)據(jù)結(jié)果用SPSS軟件做單因素相關(guān)分析，并對(duì)比個(gè)各組間轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子的表達(dá)量均數(shù)差別的顯著性檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：泡球蚴攻擊感染的小鼠在感染20天后，腹外可看到小米粒大的包囊，之后，腹腔逐步膨隆，活動(dòng)減弱，毛發(fā)稀疏。同時(shí)出現(xiàn)互相撕咬現(xiàn)象，個(gè)別小鼠咬頭，有些小鼠出現(xiàn)哮喘等過敏樣癥狀，多數(shù)小鼠尿道口紅腫，導(dǎo)致尿道水腫，排尿不暢，解剖發(fā)現(xiàn)膀胱充盈，腎臟灰白色，未做任何處理，很快死亡。所有實(shí)驗(yàn)鼠包括正常對(duì)照，感染對(duì)照，免疫和免疫后感染

5、鼠模型的成活率為73％（102/140）并且各感染組病灶的大小和重量比較的差異無顯著意義；Th1/Th2關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子在血清中的表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果顯示：比較CE免疫組、AE免疫組、卡介苗免疫組、感染對(duì)照組、CE免疫攻擊組和AE免疫攻擊組與PBS對(duì)照組小鼠的轉(zhuǎn)錄因子（GATA-3mRNA和T-betmRNA）和其標(biāo)志性細(xì)胞因子（INF-γ及IL-4）以及其它細(xì)胞因子包括GM-CSF、IL-2、IL-6、IL-10和IL-17的表達(dá)量，

6、差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。比較卡介苗免疫攻擊組與PBS對(duì)照組的轉(zhuǎn)錄因子（T-betmRNA）和其標(biāo)志性細(xì)胞因子（INF-γ）以及其它Th1/Th17型的細(xì)胞因子(GM-CSF、IL-2和IL-17)的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而比較卡介苗免疫攻擊組與PBS對(duì)照組及感染對(duì)照組的轉(zhuǎn)錄因子（GATA-3mRNA）和其標(biāo)志性的細(xì)胞因子(IL-4)和其它Th2細(xì)胞因子(IL-6和IL-10)的表達(dá)量，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

7、>0.05）?？ń槊缑庖吖艚MT-betmRNA的表達(dá)量與IFN-γ成正相關(guān)（r=0.71，P<0.05）。
　　結(jié)論：Th1/Th2細(xì)胞免疫反應(yīng)在泡球蚴感染的昆明鼠動(dòng)物模型宿主體內(nèi)可以長(zhǎng)期共同存在處于平衡狀態(tài)，反映了宿主對(duì)泡球蚴產(chǎn)生的抗感染免疫和由寄生蟲抗原誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生的免疫病理反應(yīng)的相互作用和相互適應(yīng)的復(fù)雜調(diào)節(jié)過程。實(shí)驗(yàn)證明卡介苗（BCG）有上調(diào)Th1型免疫反應(yīng)的作用,用BCG可以干預(yù)或治療由泡球蚴抗原誘導(dǎo)的晚期泡球蚴(AE)