低氧對人肺腺癌A549細胞球上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促轉(zhuǎn)移影響.pdf

1、肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。其惡性程度高，轉(zhuǎn)移發(fā)生早，對放化療敏感性較差，死亡率居高不下，其中轉(zhuǎn)移是肺癌患者死亡的主要原因之一。
　　 近年來提出的腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSC)學說及其的研究進展，為人們認識腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復發(fā)提供了一個全新的視野。根據(jù)腫瘤干細胞在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中所起的決定作用，有學者進一步提出了轉(zhuǎn)移腫瘤干細胞(migrating cancer stem cells，MCSC

2、)的概念。在絕大多數(shù)實體瘤內(nèi)存在低氧微環(huán)境，已有研究報道低氧對腫瘤轉(zhuǎn)移起促進作用；然而，目前對于CSC在低氧環(huán)境下轉(zhuǎn)移能力相關(guān)特征，尚缺乏相關(guān)的研究。
　　 本實驗旨在觀察在低氧微環(huán)境因素刺激下對具有干細胞特性的A549細胞球通過上皮-間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)機制促進肺癌轉(zhuǎn)移的影響。
　　 目的：探討低氧對人肺腺癌A549細胞來源A549細胞球EMT促進肺

3、癌轉(zhuǎn)移機制的影響。
　　 方法：采用腫瘤干細胞無血清培養(yǎng)基(serum-free medium，SFM)的方法培養(yǎng)A549細胞，誘導A549細胞球體形成；隨后將A549細胞和A549細胞球體在低氧環(huán)境下培養(yǎng)24h，分別檢測2種細胞中EMT標志物上皮細胞鈣粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表達水平，并與它們在常氧條件下的表達情況進行比較。
　　 結(jié)果：(1)免疫熒光：在常氧和低氧條件下，A549

4、細胞E-cadherin蛋白較A549細胞球表達強；常氧A549細胞球相對熒光強度為5.20±1.72，低氧A549細胞球為0；而Vimentin表達與E-cadherin結(jié)果相反，常氧A549細胞球Vimentin相對熒光強度為7.05±1.52，低氧A549細胞球為19.63±1.25。兩兩比較均具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(2)RT-PCR：在常氧和低氧條件下，A549細胞E-cadherin的mRNA較A549細胞球表達

5、強；常氧A549細胞球mRNA相對表達量為175±8.2，低氧A549細胞球為72±6.5；而Vimentin表達與E-cadherin結(jié)果相反，常氧A549細胞球Vimemin的mRNA相對表達量為244±8.1，低氧A549細胞球為307±5.1。兩兩比較均具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(3)Western-blot：在常氧和低氧條件下，A549細胞E-cadherin蛋白較A549細胞球表達強；常氧A549細胞球蛋白相對表達