微囊藻毒素-LR對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞氧化應(yīng)激影響.pdf

1、微囊藻毒素(microcystins,MCs)是由水體中藍(lán)藻類(lèi)產(chǎn)生的具有生物活性的單環(huán)七肽化合物。1990年,科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn),MC進(jìn)入肝細(xì)胞后,能強(qiáng)烈地抑制蛋白磷酸酶(PP1、PP2A)的活性,這是MC致毒的最重要的分子基礎(chǔ)；1996年P(guān)our等報(bào)道,巴西一家血液透析中心因使用含MCs污染的水作腎透析液,導(dǎo)致60例病人死亡。從此,因MCs污染所造成的野生動(dòng)物、家畜、家禽等中毒、死亡的事件陸續(xù)有了很多報(bào)道。MCs的毒性、毒性機(jī)制以及它對(duì)人

2、體健康的影響,成為研究的熱點(diǎn)。
　　 MCs從被發(fā)現(xiàn)以來(lái),肝臟一直是其第一靶器官。近來(lái)有發(fā)現(xiàn)水產(chǎn)動(dòng)物器官里,性腺是第2個(gè)靶器官,所以MCs可能具有生殖毒性。國(guó)內(nèi)外目前關(guān)于MCs引起的生殖毒性研究報(bào)道很少,機(jī)制也不清楚。
　　 目的:本課題組從事MCs毒性的相關(guān)研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)MC-LR可引起小鼠睪丸細(xì)胞DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián),導(dǎo)致生殖損傷。本研究是在先前的研究基礎(chǔ)上,以體外分離原代培養(yǎng)的大鼠睪丸支持細(xì)胞為研究對(duì)象,使其暴露于不

3、同濃度的MC-LR,研究氧化應(yīng)激在大鼠生殖系統(tǒng)細(xì)胞損傷中的作用。以此探討氧化應(yīng)激機(jī)制在MCs造成的雄性生殖功能損傷中的作用,為進(jìn)一步研究MCs對(duì)哺乳動(dòng)物生殖毒性的影響提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、分離純化清潔級(jí)未成年雄性SD大鼠睪丸支持細(xì)胞,建立體外原代培養(yǎng)模型,用Feulgen染色進(jìn)行鑒定。MTT法描述生長(zhǎng)曲線。以濃度為0～15μg/L的MC-LR對(duì)支持細(xì)胞染毒24h,確定MC-LR對(duì)細(xì)胞活性的影響。

4、　　 2、測(cè)定MC-LR對(duì)細(xì)胞內(nèi)LDH、MDA、SOD、ROS的影響:用不同濃度(0、0.15μg/L、1.5μg/L、15μg/L)MC-LR處理支持細(xì)胞,分別在6、12、24h后,提取細(xì)胞,用DCFH-DA法測(cè)定ROS,比色法測(cè)定LDH,TBA法測(cè)定MDA,羥胺法測(cè)定SOD。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:運(yùn)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件的單因素方差分析(analysis ofvariance,ANOVA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(檢驗(yàn)水

5、準(zhǔn)α=0.05)
　　 結(jié)果：
　　 1、本次試驗(yàn)分離培養(yǎng)的支持細(xì)胞體外生長(zhǎng)良好,細(xì)胞純度較高,可以用于體外實(shí)驗(yàn)研究。不同濃度的MC-LR染毒體外培養(yǎng)第4d的支持細(xì)胞24h后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)MC-LR在0～15μg/L濃度范圍時(shí),細(xì)胞存活率無(wú)明顯影響。
　　 2、本次研究發(fā)現(xiàn),MC-LR作用于支持細(xì)胞后6～24h,.各處理組的細(xì)胞內(nèi)劑量、時(shí)間依賴(lài)性ROS均有所增加,12h和24h時(shí)高劑量組與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、＜0.05)。各處理組的細(xì)胞內(nèi)劑量、時(shí)間依賴(lài)的LDH漏出率改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。此次不同的染毒時(shí)間及各染毒劑量組的細(xì)胞中MDA含量變化與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與對(duì)照組相比24h中等劑量和高劑量SOD活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、MC-LR在0～15μg/L濃度范圍內(nèi)對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞的存活率無(wú)明顯影響。
　　 2、MC-LR可以導(dǎo)致體外培養(yǎng)