EB病毒DNA定量檢測在鼻咽癌診治中的研究及以分子標記物預測、監(jiān)測鼻咽癌骨轉移的研究.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是我國常見的惡性腫瘤之一，尤在華南地區(qū)最常見。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段，對局部晚期鼻咽癌，目前的標準治療是同期放、化療，但對遠處轉移的控制并不理想。目前的臨床分期系統(tǒng)尚未能有效地預測局部晚期患者接受同期放、化治療后是否仍有遠處轉移的風險，因此有必要尋找一項新的分子生物學指標篩選易發(fā)生遠處轉移的高?；颊?，指導臨床進行最適宜的個體化的放、化綜合治療。EB病毒(Epste

2、in-Barrvirus,EBV)感染是鼻咽癌的病因之一，血漿EBV DNA濃度與鼻咽癌的分期、療效、預后相關，但血漿EBV DNA濃度與腫瘤負荷的關系，以及不同時期(治療前、治療后)EBV DNA的臨床意義，目前尚未明確。在本研究的第一部分，我們探討了NPC患者治療前、后血漿EBV DNA濃度與腫瘤負荷、臨床療效，尤其是遠處轉移的關系，探索其作為分子分期指標指導臨床治療選擇的可行性。 骨是鼻咽癌遠處轉移最常見的部位，骨轉移瘤可

3、導致疼痛、運動功能障礙以及骨相關事件(Skeletal-related events,SREs，包括病理性骨折、脊髓壓迫等)等嚴重后果，顯著降低患者的生活質量、縮短生存期，是影響惡性腫瘤治療成敗與患者生存的主要因素之一。在骨轉移瘤引起骨破壞的發(fā)生機制中，包括細胞因子的趨化、轉化作用及破骨細胞與成骨細胞的相互作用。骨唾液酸蛋白(Bonesialoprotein,BSP)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)是由成骨細胞、破骨細胞等合

4、成的細胞外基質中的糖蛋白。近年的研究發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細胞表面表達有BSP、OPN，這兩種蛋白介導腫瘤細胞容易粘附于成骨細胞、破骨細胞形成骨轉移病灶。由此認為，這兩種蛋白的表達與惡性腫瘤骨轉移相關，可能是預后不良及早期發(fā)生骨轉移的預測指標。本研究第二部分將檢測鼻咽癌患者腫瘤組織中BSP和OPN的表達情況，并分析其表達與鼻咽癌骨轉移及預后的關系。雙磷酸鹽的應用是惡性腫瘤骨轉移治療策略中的重要部分，但在鼻咽癌骨轉移的患者中雙磷酸鹽應用的研究較少，

5、能否預防或減少SREs的作用不詳。近年來有研究報道，通過監(jiān)測一些特異性反映骨溶解的骨代謝生化指標(Bonemarker)如：骨基質Ⅰ型膠原的降解產(chǎn)物氨基末端肽(N-telopeptide，NTx)的水平(尿NTx的水平)，可以有效地預測雙磷酸鹽治療實體瘤骨轉移時SREs發(fā)生的風險，監(jiān)測骨破壞、骨修復的情況。本研究第三部分將有骨轉移的鼻咽癌患者隨機分成兩組，一組在應用常規(guī)化療的基礎上使用唑來磷酸治療，另一組單純化療，比較兩組患者治療過程中

6、尿NTx變化的差別，初步評價唑來磷酸治療鼻咽癌骨轉移效果。 第一部分血漿EB病毒DNA定量檢測在鼻咽癌診治中的應用研究 目的：EB病毒感染與鼻咽癌發(fā)病密切相關，本研究探討治療前、后血漿EBVDNA濃度與鼻咽癌腫瘤負荷、預后的關系。 方法：69例初治鼻咽癌患者分別在治療前、后采用熒光定量PCR方法檢測血漿EBV DNA濃度。通過逐層疊加CT/MRI上勾畫的鼻咽大體腫瘤體積和區(qū)域淋巴結體積之和計算為腫瘤體積。所有患者

7、按計劃隨訪，進行遠期療效及生存的評價。EBV DNA濃度與腫瘤體積的關系用Spearman相關系數(shù)表示，EBV DNA濃度組間比較用Kruskal-Wallis秩和檢驗，EBV DNA檢出率組間比較用x<'2>檢驗，壽命表法計算生存率，Kaplan-Meier法比較生存情況，并進行Log-rank檢驗，Cox比例風險模型進行預后的多因素分析。 結果：治療前血漿EBV DNA濃度與腫瘤體積顯著相關(Spearman相關系數(shù)0.59

8、0；P<0.001)。遠處轉移患者治療前血漿EBV DNA中位濃度(27000copies/ml)及治療后EBV DNA檢出率(55.56﹪)均高于持續(xù)緩解者(4000eopies/ml，5.56﹪)及局部復發(fā)者(3850copies/ml，0﹪)，P值分別為0.039，0.001。以治療前20000copies/ml，治療后轉陰性(0 copies/ml)為界值點，治療前、后EBV DNA低濃度患者的無復發(fā)生存率、無轉移生存率及總生存

9、率均高于高濃度患者，差異有統(tǒng)計學意義。綜合治療前后血漿EBV DNA濃度的生存分析顯示無論治療前EBV DNA是否大于20000copies/ml，治療后EBV DNA轉陰性的患者均有較好的無轉移生存(P=0.000)。Cox回歸分析顯示治療后血漿EBV DNA能否轉陰性是遠處轉移唯一的獨立預后因素(P=0.004，HR=16.491)。 結論：治療前、后EBV DNA濃度在鼻咽癌診治中均具有不同的重要臨床意義。治療前EBV D

10、NA反映腫瘤負荷，預測療效和生存，而治療后血漿EBV DNA能否清除則能有效地預測遠處轉移的風險。 第二部分 BSP、OPN在鼻咽癌的表達及預測鼻咽癌骨轉移的研究 目的：骨是鼻咽癌最常發(fā)生的轉移部位，目前尚無預測鼻咽癌骨轉移的標記物。本研究探討鼻咽癌組織中BSP、OPN的表達及與鼻咽癌患者臨床特征、預后，尤其是骨轉移的關系。 方法：本研究收集1999年5月至2005年4月在中山大學腫瘤防治中心確診的136例Ⅲ～Ⅳ

11、期鼻咽癌初診患者鼻咽活檢石蠟標本，制作成鼻咽癌組織芯片。應用免疫組織化學方法檢測BSP、OPN蛋白的表達情況。蛋白表達情況組間比較用Kruscal-Wallis秩和檢驗，壽命表法計算生存率，Kaplan-Meier法比較生存情況，并進行Log-rank檢驗，Cox比例風險模型進行預后的多因素分析。 結果：在136例鼻咽癌組織中BSP的陽性率為87.5﹪(H9/136)，陽性表達部位在腫瘤細胞胞膜及胞漿。OPN的陽性率為85.9﹪

12、(117/136)，陽性表達部位主要在腫瘤細胞胞膜及胞漿。BSP在未分化型非角化性癌(WHO分型：Ⅲ型)組織中的表達率高于分化型非角化性癌(WHO分型：Ⅱ型)(91﹪vs．72﹪，P=0.01)，在其它各臨床指標組間的差異無統(tǒng)計學意義。OPN在初診時有遠處轉移的患者腫瘤組織中的表達率高于無轉移者(100﹪vs．85.6﹪，P=0.03)，在其它各臨床指標組間無差異。在有完整隨訪資料的119例患者，骨轉移患者的BSP高表達率與骨外轉移患者

13、、無轉移患者無明顯差異(68.8﹪vs．71.4﹪vs．50.6﹪，P=0.18)，OPN高表達率明顯高于骨外轉移患者、無轉移患者，差異有統(tǒng)計學意義(56.3﹪vs．42.9﹪vs．27.0﹪，P=0.05)。BSP高表達組與低表達組的2年無骨轉移生存率、無骨外轉移生存率、總生存率分別是82.10﹪vs．89.22﹪(P=0.31)、75.70﹪vs.85.99﹪(P=0.22)、86.40﹪vs.91.28﹪(P=0.68)，差異均無

14、統(tǒng)計學意義。OPN高表達組與低表達組的2年無骨轉移生存率、無骨外轉移生存率、總生存率分別是77.09﹪vs.89.41﹪(P=0.06)、70.21﹪vs.85.01﹪(P=0.03)、90.80﹪vs.87.38﹪(P=0.89)。 結論：BSP、OPN蛋白在鼻咽癌組織中高表達。BSP蛋白的表達與鼻咽癌的侵襲、轉移無明顯相關。OPN蛋白的表達與鼻咽癌骨轉移的發(fā)生初步顯示出一定關系，值得在擴大樣本量的試驗中進一步證實，幫助篩選高

15、?；颊哌M行更緊密的隨訪及預防性治療。 第三部分唑來磷酸降低鼻咽癌骨轉移患者尿氨基末端肽的前瞻性、隨機、開放的臨床研究 目的：評價唑來磷酸聯(lián)合抗腫瘤治療與單純抗腫瘤治療降低鼻咽癌骨轉移患者的尿氨基末端肽(NTx)水平的差異。 方法：20例初治鼻咽癌骨轉移患者隨機分組，分別接受唑來磷酸(4mg，每4周1次，連續(xù)3次)聯(lián)合抗腫瘤治療及單純抗腫瘤治療。所有患者在入組第1、5、9、10周采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測尿NTx值。主

16、要研究終點是尿NTx的改變(與基線水平相比治療3月后尿NTx的變化率)。 結果：試驗組平均基線尿NTx值為60.97±11.85 nM BCE/mM，末次隨訪平均尿NTx值為30.31±8.61 nM BCE/mM，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.01)。對照組平均基線尿NTx值為59.71±8.49 nM BCE/mM，末次隨訪平均尿NTx值為68.79±43.74 nM BCE/mM，較基線值上升(P=0.73)。試驗組NTx變化