鼻咽癌高危人群中鼻咽拭子EB病毒DNA定量檢測及其在鼻咽癌篩查中的應(yīng)用.pdf

1、目的:在鼻咽癌的高發(fā)地區(qū)，幾乎100％的低分化型鼻咽癌患者攜帶有EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)。目前，EBV相關(guān)抗體血清學(xué)檢測已廣泛應(yīng)用于鼻咽癌的大規(guī)模人群篩查。對血清學(xué)篩查出抗體陽性的高危人群需要進(jìn)行定期隨訪，隨訪的方法仍是以檢測血清中EBV抗體及鼻咽鏡檢查為主，但此時(shí)檢查方法的特異度已大幅降低，這些高危人群經(jīng)過反復(fù)的檢查，血清抗體一直處于陽性狀態(tài)卻無腫瘤的發(fā)生，即絕大多數(shù)的血清EBV抗體陽性的人群在隨訪過程

2、中經(jīng)受了不必要的抗體檢測及鼻咽鏡檢查。因此尋找新的生物學(xué)標(biāo)志物及方法來提高篩查診斷效率對鼻咽癌的篩查有較大的臨床意義。本研究旨在通過采集鼻咽拭子的方法，檢測鼻咽癌高危人群中鼻咽部EBV-DNA載量，并評價(jià)這一指標(biāo)是否能提高隨訪方法的特異度，減少需要反復(fù)隨訪人群的數(shù)量。
　　方法:廣西蒼梧縣作為國家癌癥早診早治示范基地項(xiàng)目點(diǎn)，在2006年1月至2013年6月實(shí)施了鼻咽癌早診早治篩查項(xiàng)目，從蒼梧縣隨機(jī)抽取3個(gè)鎮(zhèn)（石橋、沙頭、梨埠鎮(zhèn)），

3、30-59歲當(dāng)?shù)鼐用窦{入篩查對象，篩查對象經(jīng)過免疫酶法檢測血清EB病毒抗體、臨床檢查（頭、頸部、鼻咽部檢查）初次篩查后，將EB病毒抗體陽性者定為鼻咽癌高危人群并納入高危人群隊(duì)列進(jìn)行隨訪。在進(jìn)行高危人群隨訪復(fù)查時(shí)，除采血進(jìn)行免疫酶法檢測血清VCA/IgA抗體滴度及臨床檢查外，同時(shí)收集到部分鼻咽癌高危人群鼻咽拭子樣本。本研究通過提取鼻咽拭子樣本中的DNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法(q-PCR)檢測EB病毒DNA載量水平，分析鼻咽癌高危人群

4、中血清VCA/IgA抗體滴度及鼻咽部EB病毒DNA載量分布情況，然后分析鼻咽拭子中EB病毒DNA載量與血清VCA/IgA抗體水平的關(guān)系，對鼻咽癌病例與高危人群的VCA/IgA與EBV-DNA載量水平進(jìn)行比較。最后，比較不同截?cái)嘀?cut-off value)下VCA/IgA與EBV-DNA載量的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值，制作受試工作者特征曲線（ROC曲線），通過計(jì)算曲線下面積（Area under the curve，AU

5、C）評估和對比兩個(gè)檢測指標(biāo)的診斷效能。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況:總共22184人納入初篩，篩查出1045例高危人群，鼻咽癌患者25例。高危人群隨訪中檢出8例新發(fā)鼻咽癌病例。
　　2.q-PCR定量結(jié)果顯示，高危人群中89％(802/905)的鼻咽拭子中可檢測出EBV-DNA(＞0copies/swab)，中位拷貝數(shù)為(6.7×103copies/swab)。在高危人群中復(fù)查VCA/IgA陽性率為94％(847/9

6、05)，平均抗體滴度為1∶10.7。
　　3.在高危人群中，女性鼻咽部EBV-DNA載量為6.1×103copies/swab，男性為2.9×103copies/swab，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-3.257，P=0.001);而VCA/IgA抗體水平在性別上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-0.372，P=0.710)。該人群中高年齡組的鼻咽部EBV-DNA載量及VCA/IgA抗體滴度高于低年齡組，兩者均有隨著年齡的增長而升高的趨勢，

7、但無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的關(guān)聯(lián)（Spearman相關(guān)系數(shù)分別為0.139，P＜0.001;0.104，P＜0.001）。
　　4.在高危人群中，多重線性回歸分析顯示，在調(diào)整性別、年齡和人類基因拷貝數(shù)之后，鼻咽部EBV-DNA水平隨著血清VCA/IgA抗體滴度的增高而升高（Spearman相關(guān)系數(shù)為0.229，P＜0.001）。
　　5.在高危人群隊(duì)列的隨訪中，檢出8例鼻咽癌病人，6例男性，2例女性，其中7例為臨床早期病例。檢測發(fā)現(xiàn)鼻咽癌

8、病人的鼻咽部EBV載量和血清VCA/IgA抗體水平均顯著高于未患病人群（EBV載量比較:Z=-4.688，P＜0.001; VCA/IgA比較:Z=-4.097，P＜0.001）。鼻咽部EBV載量及VCA/IgA水平與病人的臨床分期均未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（Spearman相關(guān)系數(shù)分別為0.385，P=0.346;0.193，P=0.648）。
　　6.以非患病組人群的EBV-DNA載量的均數(shù)加上2倍標(biāo)準(zhǔn)差得到EBV-DNA的最佳cut

9、-off值（即4.7×105copies/swab），此cut-off值下的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值分別為87.5％，98.9％，41.2％，99.9％。相比之下，血清VCA/IgA抗體的最佳cut-off值（即1∶20）為均數(shù)加上1倍標(biāo)準(zhǔn)差，相應(yīng)的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值分別為87.5％，75.0％，3.1％，99.9％。ROC曲線比較顯示鼻咽部EBV-DNA的曲線下面積大于VCA/IgA(0.980vs0

10、.895)。在該高危人群中，有95％以上的個(gè)體低于EBV-DNA的最佳cut-off值，即超過95％的個(gè)體的EBV-DNA載量低于4.7×105copies/swab被判為陰性，可以退出高危人群隨訪隊(duì)列，減少了大量需要反復(fù)隨訪的高危人群數(shù)量。
　　結(jié)論:
　　1.在鼻咽癌高危人群中，鼻咽部EBV-DNA有較高的檢出率。
　　2.女性鼻咽部EBV-DNA載量高于男性，高齡組人群的EBV-DNA高于低年齡組人群，但與年齡均